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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 一个平末端和粘性末端怎样连接比较好
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沧海一声笑7

新虫 (初入文坛)

[求助] 一个平末端和粘性末端怎样连接比较好已有1人参与

一个平末端和粘性末端怎样连接比较好？我双酶切目的片段，可是一个产生平末端，一个产生粘性末端，怎么连接比较好呀？请大家多多指教
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1楼2012-10-28 17:37:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是说目的片段的两端一个是平端，一个是粘性末端？把载体切成一个平端一个粘性末端不就好了？
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2楼2012-10-29 01:12:35
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jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议做TA克隆，连接平末端的时候时间稍微长点就可以了。
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3楼2012-10-29 18:03:06
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沧海一声笑7

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jingdejun at 2012-10-29 18:03:06
建议做TA克隆，连接平末端的时候时间稍微长点就可以了。

是酶切后出现的，不能再克隆了吧
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4楼2012-10-31 22:37:58
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沧海一声笑7

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-29 01:12:35
你是说目的片段的两端一个是平端，一个是粘性末端？把载体切成一个平端一个粘性末端不就好了？

载体也是用相同的内切酶切成一个平端，一个粘性末端，就是平末端连接效率好低
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5楼2012-10-31 22:39:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 沧海一声笑7 at 2012-10-31 22:39:04
载体也是用相同的内切酶切成一个平端，一个粘性末端，就是平末端连接效率好低...

连平端效率是比较低，你直接16°C连过夜就可以了。
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6楼2012-11-01 06:36:47
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

粘端使用klenow 酶补齐，再进行和平端的连接..
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7楼2012-11-08 20:50:58
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ytetyio09

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以试试这篇论文的方法，虽然是个小的改进，但是值得一试，而且很方便：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256
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8楼2014-03-25 19:16:57
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moshangchenx

金虫 (正式写手)
楼主，您好！不知道您最终是怎么解决这个问题的，我现在做的这个一端平一端粘都快两个月了，还是连不上,请您赐教！
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科研无止境，我心成蹉跎
9楼2015-01-12 16:42:41
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