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沧海一声笑7

新虫 (初入文坛)

[求助] 一个平末端和粘性末端怎样连接比较好 已有1人参与

一个平末端和粘性末端怎样连接比较好?我双酶切目的片段,可是一个产生平末端,一个产生粘性末端,怎么连接比较好呀?请大家多多指教
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是说目的片段的两端一个是平端,一个是粘性末端?把载体切成一个平端一个粘性末端不就好了?
2楼2012-10-29 01:12:35
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jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议做TA克隆,连接平末端的时候时间稍微长点就可以了。
3楼2012-10-29 18:03:06
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沧海一声笑7

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jingdejun at 2012-10-29 18:03:06
建议做TA克隆,连接平末端的时候时间稍微长点就可以了。

是酶切后出现的,不能再克隆了吧
4楼2012-10-31 22:37:58
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沧海一声笑7

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-29 01:12:35
你是说目的片段的两端一个是平端,一个是粘性末端?把载体切成一个平端一个粘性末端不就好了?

载体也是用相同的内切酶切成一个平端,一个粘性末端,就是平末端连接效率好低
5楼2012-10-31 22:39:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 沧海一声笑7 at 2012-10-31 22:39:04
载体也是用相同的内切酶切成一个平端,一个粘性末端,就是平末端连接效率好低...

连平端效率是比较低,你直接16°C连过夜就可以了。
6楼2012-11-01 06:36:47
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

粘端使用klenow 酶补齐,再进行和平端的连接..
7楼2012-11-08 20:50:58
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ytetyio09

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以试试这篇论文的方法,虽然是个小的改进,但是值得一试,而且很方便:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256
8楼2014-03-25 19:16:57
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moshangchenx

金虫 (正式写手)

楼主,您好!不知道您最终是怎么解决这个问题的,我现在做的这个一端平一端粘都快两个月了,还是连不上,请您赐教!
科研无止境,我心成蹉跎
9楼2015-01-12 16:42:41
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