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汕头大学海洋科学接受调剂
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20111987

金虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR结果如何处理

大家好,我刚做完一批荧光定量PCR,结果如附件所示,但是,结果该如何处理,多种不懂啊,得到的数据各平行之间重复性不好,可能原因会有哪些?对照组和处理组结果之间的差异是否显著怎么确定?请各位大侠帮忙看一下,谢谢!
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  • 附件 1 : 实验数据.xls
  • 2012-10-05 10:22:21, 14.5 K

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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-06 17:06:31
扩增效率20%

这个。。。
你的细胞表达这个基因么
你确定么?
还有,就是你的MIX加了么。。。
有的时候,由于我们做realtime的时候,用的体系比较小,可能有的时候忘记加了。就扩增不起来了。。。
还有,我们做realtime的时候,一般每个样,都会做1-2个技术重复的。就是每次都有2-3个孔是一个样的,一模一样的东西,然后,一起看这个扩增情况的,把手抖啊什么的,都可以去掉的。。。
6楼2012-10-05 20:58:04
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-06 17:05:56
前提:目标序列和内参序列的扩增效率接近100%且偏      差在  5%以内
  1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值:
           ΔCT(test)= CT (target,test) - CT (ref,test)
      ΔCT(calibrator)= CT (target, calibrator) - CT (ref, calibrator)
  2、用校准样本的ΔCT值归一试验样本的ΔCT值:
         ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
  3、计算表达水平比率:
                    2 –ΔΔCT=表达量的比值
2楼2012-10-05 10:47:50
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20111987

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-10-05 10:47:50
前提:目标序列和内参序列的扩增效率接近100%且偏      差在  5%以内
  1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值:
           ΔCT(test)= CT (target,test) - CT (ref,test)
      ΔCT(calibrator)= CT ...

我这样得到结果了,但是下一步该怎么分析,这样的结果说明什么,这几组结果之间有显著性差异吗,显著性差异又该如何分析?急求解答啊
        对照组        处理组1        处理组2        处理组3        处理组4
2 –ΔΔCT        1.00         0.59         1.36         0.88         0.96
3楼2012-10-05 15:42:01
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20111987

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-10-05 10:47:50
前提:目标序列和内参序列的扩增效率接近100%且偏      差在  5%以内
  1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值:
           ΔCT(test)= CT (target,test) - CT (ref,test)
      ΔCT(calibrator)= CT ...

还有就是,如果扩增效率出现20%多,会是什么原因造成的呢?
4楼2012-10-05 15:43:19
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