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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR结果如何处理
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20111987

金虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR结果如何处理

大家好，我刚做完一批荧光定量PCR，结果如附件所示，但是，结果该如何处理，多种不懂啊，得到的数据各平行之间重复性不好，可能原因会有哪些？对照组和处理组结果之间的差异是否显著怎么确定？请各位大侠帮忙看一下，谢谢！
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  • 附件 1 : 实验数据.xls
    • 2012-10-05 10:22:21, 14.5 K

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1楼 2012-10-05 10:22:29
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20111987

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-10-05 10:47:50
前提：目标序列和内参序列的扩增效率接近100％且偏      差在  5％以内
  1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值：
           ΔCT（test)= CT （target,test) - CT （ref,test)
      ΔCT（calibrator)= CT ...

还有就是，如果扩增效率出现20%多，会是什么原因造成的呢？
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4楼2012-10-05 15:43:19
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-06 17:05:56
前提：目标序列和内参序列的扩增效率接近100％且偏      差在  5％以内
  1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值：
           ΔCT（test)= CT （target,test) - CT （ref,test)
      ΔCT（calibrator)= CT （target, calibrator) - CT （ref, calibrator)
  2、用校准样本的ΔCT值归一试验样本的ΔCT值：
         ΔΔCT= ΔCT（test) - ΔCT（calibrator)
  3、计算表达水平比率：
                    2 –ΔΔCT=表达量的比值
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2楼2012-10-05 10:47:50
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20111987

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-10-05 10:47:50
前提：目标序列和内参序列的扩增效率接近100％且偏      差在  5％以内
  1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值：
           ΔCT（test)= CT （target,test) - CT （ref,test)
      ΔCT（calibrator)= CT ...

我这样得到结果了，但是下一步该怎么分析，这样的结果说明什么，这几组结果之间有显著性差异吗，显著性差异又该如何分析？急求解答啊
        对照组        处理组1        处理组2        处理组3        处理组4
2 –ΔΔCT        1.00         0.59         1.36         0.88         0.96
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3楼2012-10-05 15:42:01
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-06 17:06:11
有没有好好念过统计学啊，每个处理一个样，你怎么做统计啊，还是说你的每个处理其实就是一个平行样》？？？
细胞实验，我们实验室要求每次3个复孔，然后平行做3-4次
动物实验，我们用的近交系的，所以一般做2-3次，最好做3次以上，每次每组4-6只老鼠
这样才能做统计
一般一个样是不做统计的，就是看个趋势
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5楼2012-10-05 20:54:14
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