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20111987

金虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR结果如何处理

大家好,我刚做完一批荧光定量PCR,结果如附件所示,但是,结果该如何处理,多种不懂啊,得到的数据各平行之间重复性不好,可能原因会有哪些?对照组和处理组结果之间的差异是否显著怎么确定?请各位大侠帮忙看一下,谢谢!
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  • 附件 1 : 实验数据.xls
  • 2012-10-05 10:22:21, 14.5 K

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20111987

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-10-05 10:47:50
前提:目标序列和内参序列的扩增效率接近100%且偏      差在  5%以内
  1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值:
           ΔCT(test)= CT (target,test) - CT (ref,test)
      ΔCT(calibrator)= CT ...

还有就是,如果扩增效率出现20%多,会是什么原因造成的呢?
4楼2012-10-05 15:43:19
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-06 17:05:56
前提:目标序列和内参序列的扩增效率接近100%且偏      差在  5%以内
  1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值:
           ΔCT(test)= CT (target,test) - CT (ref,test)
      ΔCT(calibrator)= CT (target, calibrator) - CT (ref, calibrator)
  2、用校准样本的ΔCT值归一试验样本的ΔCT值:
         ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
  3、计算表达水平比率:
                    2 –ΔΔCT=表达量的比值
2楼2012-10-05 10:47:50
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20111987

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-10-05 10:47:50
前提:目标序列和内参序列的扩增效率接近100%且偏      差在  5%以内
  1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值:
           ΔCT(test)= CT (target,test) - CT (ref,test)
      ΔCT(calibrator)= CT ...

我这样得到结果了,但是下一步该怎么分析,这样的结果说明什么,这几组结果之间有显著性差异吗,显著性差异又该如何分析?急求解答啊
        对照组        处理组1        处理组2        处理组3        处理组4
2 –ΔΔCT        1.00         0.59         1.36         0.88         0.96
3楼2012-10-05 15:42:01
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-06 17:06:11
有没有好好念过统计学啊,每个处理一个样,你怎么做统计啊,还是说你的每个处理其实就是一个平行样》???
细胞实验,我们实验室要求每次3个复孔,然后平行做3-4次
动物实验,我们用的近交系的,所以一般做2-3次,最好做3次以上,每次每组4-6只老鼠
这样才能做统计
一般一个样是不做统计的,就是看个趋势
5楼2012-10-05 20:54:14
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