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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 马上要开始做CTAB提乳酸菌DNA了，各位大神帮忙看看实验步骤有木有啥致命问题额
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牛圈圈

铜虫 (初入文坛)

[求助] 马上要开始做CTAB提乳酸菌DNA了，各位大神帮忙看看实验步骤有木有啥致命问题额

将100ml培养液（LB培养）转移至离心管中，12000rpm离心5min，弃上清。
2. 加入9.5mlTE悬浮沉淀，并加0.5ml10%SDS。混匀37℃保温1小时。
3. 加1.5ml 5mol/LNaCl，混匀。
4. 加1.5m CTAB/NaCl溶液，混匀，65℃保温20分钟。
5. 用等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）抽提，12000rpm离心10分钟，将上清液移至干净离心管。
6. 用等体积异戊醇：氯仿（1：24）抽提，12000rpm离心10分钟，取上清液移至干净管中。
7. 加入0.6-1倍体积异丙醇，-20℃静置30min.
8. 12000rpm离心10min弃上清。
9. 将沉淀悬浮于10ml超纯水中。
10. 加入等体积饱和酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），上下颠倒数次混匀。
11. 12000rpm离心10min,吸取上相液体。
12. 加入等体积饱和氯仿/异戊醇（24：1），上下颠倒数次混匀。
13. 12000rpm离心10min,吸取上相液体。
14. 加入1/10体积3M NaAc，在加入2倍体积预冷的无水乙醇，-20℃放置30min.
15. 12000rpm离心15min,弃上清，用70%的乙醇洗涤沉淀。
16. 自然风干后，加入1-2mlTE或者超纯水溶解DNA。

大神们，现在实验室条件有限，我想着都用10000rpm多转一会儿，不知道可行不？
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1楼 2012-10-02 20:19:38
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wangqi20092

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
牛圈圈: 金币+2 2012-10-04 16:41:16
第7步中，加0.6体积的异丙醇室温放置30min，第14步-20放置1h左右比较好。另外尽量用12000，转速达不到，加长时间是没用的，转速12000分离效果比较好！！！
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4楼2012-10-04 10:55:24
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1万转足够，无需增加时间。
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3楼2012-10-04 08:05:29
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)
乳酸菌一般要用MRS培养基，LB培养基营养成分不足，很难长起来。
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5楼2012-10-05 09:46:57
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牛圈圈

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by scienzyme at 2012-10-05 09:46:57
乳酸菌一般要用MRS培养基，LB培养基营养成分不足，很难长起来。

很感谢~提醒得很及时呢~嘿嘿~
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6楼2012-10-09 15:54:57
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