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马上要开始做CTAB提乳酸菌DNA了，各位大神帮忙看看实验步骤有木有啥致命问题额
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将100ml培养液（LB培养）转移至离心管中，12000rpm离心5min，弃上清。 2. 加入9.5mlTE悬浮沉淀，并加0.5ml10%SDS。混匀37℃保温1小时。 3. 加1.5ml 5mol/LNaCl，混匀。 4. 加1.5m CTAB/NaCl溶液，混匀，65℃保温20分钟。 5. 用等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）抽提，12000rpm离心10分钟，将上清液移至干净离心管。 6. 用等体积异戊醇：氯仿（1：24）抽提，12000rpm离心10分钟，取上清液移至干净管中。 7. 加入0.6-1倍体积异丙醇，-20℃静置30min. 8. 12000rpm离心10min弃上清。 9. 将沉淀悬浮于10ml超纯水中。 10. 加入等体积饱和酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），上下颠倒数次混匀。 11. 12000rpm离心10min,吸取上相液体。 12. 加入等体积饱和氯仿/异戊醇（24：1），上下颠倒数次混匀。 13. 12000rpm离心10min,吸取上相液体。 14. 加入1/10体积3M NaAc，在加入2倍体积预冷的无水乙醇，-20℃放置30min. 15. 12000rpm离心15min,弃上清，用70%的乙醇洗涤沉淀。 16. 自然风干后，加入1-2mlTE或者超纯水溶解DNA。 大神们，现在实验室条件有限，我想着都用10000rpm多转一会儿，不知道可行不？ |
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6楼2012-10-09 15:54:57
chenguestc
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scienzyme
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