| 查看: 1648 | 回复: 5 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
马上要开始做CTAB提乳酸菌DNA了，各位大神帮忙看看实验步骤有木有啥致命问题额
|
||
|
将100ml培养液（LB培养）转移至离心管中，12000rpm离心5min，弃上清。 2. 加入9.5mlTE悬浮沉淀，并加0.5ml10%SDS。混匀37℃保温1小时。 3. 加1.5ml 5mol/LNaCl，混匀。 4. 加1.5m CTAB/NaCl溶液，混匀，65℃保温20分钟。 5. 用等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）抽提，12000rpm离心10分钟，将上清液移至干净离心管。 6. 用等体积异戊醇：氯仿（1：24）抽提，12000rpm离心10分钟，取上清液移至干净管中。 7. 加入0.6-1倍体积异丙醇，-20℃静置30min. 8. 12000rpm离心10min弃上清。 9. 将沉淀悬浮于10ml超纯水中。 10. 加入等体积饱和酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），上下颠倒数次混匀。 11. 12000rpm离心10min,吸取上相液体。 12. 加入等体积饱和氯仿/异戊醇（24：1），上下颠倒数次混匀。 13. 12000rpm离心10min,吸取上相液体。 14. 加入1/10体积3M NaAc，在加入2倍体积预冷的无水乙醇，-20℃放置30min. 15. 12000rpm离心15min,弃上清，用70%的乙醇洗涤沉淀。 16. 自然风干后，加入1-2mlTE或者超纯水溶解DNA。 大神们，现在实验室条件有限，我想着都用10000rpm多转一会儿，不知道可行不？ |
回复此楼» 猜你喜欢
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有264人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 在用CTAB法提取曲霉总DNA时，提取很多次没有成功，期望大家多多帮助。
已经有16人回复
- 【求助/交流】CTAB法提取了dna，帮我看看图片，帮忙提点改进方法
已经有20人回复
- 【求助/交流】急！ 帮忙分析下CTAB法提取真菌DNA的电泳图
已经有4人回复
6楼2012-10-09 15:54:57
chenguestc
木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 576 (博士)
- 贵宾: 0.4
- 金币: 4526.9
- 散金: 1639
- 红花: 176
- 帖子: 4708
- 在线: 353.5小时
- 虫号: 1337860
- 注册: 2011-07-05
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
3楼2012-10-04 08:05:29
4楼2012-10-04 10:55:24
scienzyme
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 15595.4
- 红花: 2
- 帖子: 1935
- 在线: 347.8小时
- 虫号: 137301
- 注册: 2005-12-17
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2012-10-05 09:46:57