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adloves

新虫 (小有名气)

[求助] 大片段6kb-9kb DNA片段PCR窍门

最近在P大片段6kb-9kb DNA片段,老是P不出来,请问P长片段有哪些窍门?是不是买P长片段的Taq酶就行了, 求高手指点~~感激不尽~~
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杜钰~
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adloves

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jingdejun at 2012-09-22 11:00:06
楼主可以试一下LA-PCR,传说中LA-PCR可以扩出35kb的带哦。

好的,我试试看吧~~谢啦!
杜钰~
4楼2012-09-22 11:14:41
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查看全部 16 个回答

逆天打酱油

金虫 (正式写手)

好容易突变的吧
觉得可以分段克隆到载体上再用酶切酶连合并起来
全长这么长的真心没尝试过
2楼2012-09-22 09:39:50
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jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主可以试一下LA-PCR,传说中LA-PCR可以扩出35kb的带哦。
3楼2012-09-22 11:00:06
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-09-24 10:33:51
嗯....................
        同意3楼,建议选用TAKARA公司的LA-Taq来做,但是要注意,保真性只高出Taq3倍左右,如果头疼保真性的话,基于LA-PCR的原理,还是建议选择做融合PCR,两段融合,设计好引物还是很好做的。酶切连接个人觉得有些麻烦。
       个人看法 若有说错请高手指点
Let God do with it as He wills
5楼2012-09-22 11:46:32
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