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君子婷

银虫 (小有名气)

[求助] 各位师兄师姐,帮忙看一下琼脂糖图

这张是琼脂糖凝胶图,为什么maker没跑开啊?
还有,背景显红色,是不是EB加多了啊?
多谢!!
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再见,青春
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ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是EB加多了,不过Marker没跑开原因有很多,也许本身Marker就有问题,还有就是胶配的有问题,跑胶的电极缓冲液是不是用的久了等等都有可能,楼主结合自己的实验看看吧

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

有时候,一句话,可以改变未来
2楼2012-09-20 20:45:59
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君子婷

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-20 20:45:59
是EB加多了,不过Marker没跑开原因有很多,也许本身Marker就有问题,还有就是胶配的有问题,跑胶的电极缓冲液是不是用的久了等等都有可能,楼主结合自己的实验看看吧

“胶配的有问题”?
麻烦GG能详细解释吗?
缓冲液是新换的。呵呵。
多谢。
再见,青春
3楼2012-09-20 20:58:40
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ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-21 14:13:39
配胶的琼脂糖是国产的还是进口的,如果是国产的,那么Marker跑不开很正常,因为国产的质量不过关,最多也就能配配SDS电泳的封底胶,用在跑核酸电泳上效果很差,我们实验室以前出过类似的事情。缓冲液虽然是新换的,但也有可能是配的缓冲液1*TAE本身就没有配好的问题,当然这也会直接影响配胶质量。在溶胶的过程是否将琼脂糖热融完全也是个很关键的问题,如果看到完全透明无折射光线了,就是完全融了。
有时候,一句话,可以改变未来
4楼2012-09-21 00:31:40
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xiangyubaoer

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
EB的确是加多了。marker你用的是哪个?我以前用过一种 ladder marker,条带之前也很紧密。还有就是建议下次跑的时候时间再长一点试试。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2012-09-21 19:45:31
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君子婷

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiangyubaoer at 2012-09-21 19:45:31
EB的确是加多了。marker你用的是哪个?我以前用过一种 ladder marker,条带之前也很紧密。还有就是建议下次跑的时候时间再长一点试试。

我用的也是DNA ladder,按照说明书比例配制。看maker条带,是不是降解了啊?谢谢。呵呵。
再见,青春
6楼2012-09-22 10:35:11
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494750284

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 股鼓励交流 2012-09-24 10:29:58
实验本身就有很多不确定因素。个人建议不是偶然现象就不要纠结与原因了。重复一下,如果还是这样。一般有以下可以考虑的
一、别人的胶图有没有问题,如果其他人也这样,那换试剂。
二、如果其他人没问题,让师兄师姐看着你做一遍,因为这种本身不是复杂的实验,如果有问题很容易发现。
三、还是提醒你不要花太多时间在这种问题上,如果精力足够还是看看文章,多想想以后的实验如果更严谨吧
7楼2012-09-22 12:38:53
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-24 10:30:08
这张图跑的不错啊,MARKER也有清晰的条带,MARKER条带较粗,则表明MARKER上样量大,可减少MARKER使用量,其二后面拖尾,是降解了,还是后面有条带呀?建议跑个梯度尝试下。
8楼2012-09-22 13:58:57
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

其三,MARKER条带是不是很多呀,即间隔的大小不明显,若这样,可考虑加长点电泳时间看下。
9楼2012-09-22 14:00:36
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-24 10:30:18
有两种可能:凝胶及电泳问题,marker问题。我认为第一种的可能性不大,因为目的条带跑的还是不错的,这样凝胶和缓冲液应该没有大问题,不知道楼主目的条带多大,根据引物二聚体位置,推断应该不是很小,根据泳道中目的条带位置判断不可能是跑的时间太短的缘故。最大的可能是marker有问题,所以楼主最好看别人用该marker电泳后的效果再判断。
10楼2012-09-23 21:57:34
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