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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 各位师兄师姐，帮忙看一下琼脂糖图
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君子婷

银虫 (小有名气)

[求助] 各位师兄师姐，帮忙看一下琼脂糖图

这张是琼脂糖凝胶图，为什么maker没跑开啊？
还有，背景显红色，是不是EB加多了啊？
多谢！！
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    • 2012-09-20 20:40:35, 2.19 M

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再见，青春
1楼 2012-09-20 20:40:44
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ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是EB加多了，不过Marker没跑开原因有很多，也许本身Marker就有问题，还有就是胶配的有问题，跑胶的电极缓冲液是不是用的久了等等都有可能，楼主结合自己的实验看看吧
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君子婷
有时候，一句话，可以改变未来
2楼2012-09-20 20:45:59
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君子婷

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-20 20:45:59
是EB加多了，不过Marker没跑开原因有很多，也许本身Marker就有问题，还有就是胶配的有问题，跑胶的电极缓冲液是不是用的久了等等都有可能，楼主结合自己的实验看看吧

“胶配的有问题”？
麻烦GG能详细解释吗？
缓冲液是新换的。呵呵。
多谢。
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再见，青春
3楼2012-09-20 20:58:40
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ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-21 14:13:39
配胶的琼脂糖是国产的还是进口的，如果是国产的，那么Marker跑不开很正常，因为国产的质量不过关，最多也就能配配SDS电泳的封底胶，用在跑核酸电泳上效果很差，我们实验室以前出过类似的事情。缓冲液虽然是新换的，但也有可能是配的缓冲液1*TAE本身就没有配好的问题，当然这也会直接影响配胶质量。在溶胶的过程是否将琼脂糖热融完全也是个很关键的问题，如果看到完全透明无折射光线了，就是完全融了。
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有时候，一句话，可以改变未来
4楼2012-09-21 00:31:40
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xiangyubaoer

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
EB的确是加多了。marker你用的是哪个？我以前用过一种 ladder marker，条带之前也很紧密。还有就是建议下次跑的时候时间再长一点试试。
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君子婷
5楼2012-09-21 19:45:31
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君子婷

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiangyubaoer at 2012-09-21 19:45:31
EB的确是加多了。marker你用的是哪个？我以前用过一种 ladder marker，条带之前也很紧密。还有就是建议下次跑的时候时间再长一点试试。

我用的也是DNA ladder，按照说明书比例配制。看maker条带，是不是降解了啊？谢谢。呵呵。
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再见，青春
6楼2012-09-22 10:35:11
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494750284

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 股鼓励交流 2012-09-24 10:29:58
实验本身就有很多不确定因素。个人建议不是偶然现象就不要纠结与原因了。重复一下，如果还是这样。一般有以下可以考虑的
一、别人的胶图有没有问题，如果其他人也这样，那换试剂。
二、如果其他人没问题，让师兄师姐看着你做一遍，因为这种本身不是复杂的实验，如果有问题很容易发现。
三、还是提醒你不要花太多时间在这种问题上，如果精力足够还是看看文章，多想想以后的实验如果更严谨吧
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7楼2012-09-22 12:38:53
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-24 10:30:08
这张图跑的不错啊，MARKER也有清晰的条带，MARKER条带较粗，则表明MARKER上样量大，可减少MARKER使用量，其二后面拖尾，是降解了，还是后面有条带呀？建议跑个梯度尝试下。
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8楼2012-09-22 13:58:57
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

其三，MARKER条带是不是很多呀，即间隔的大小不明显，若这样，可考虑加长点电泳时间看下。
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9楼2012-09-22 14:00:36
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-24 10:30:18
有两种可能：凝胶及电泳问题，marker问题。我认为第一种的可能性不大，因为目的条带跑的还是不错的，这样凝胶和缓冲液应该没有大问题，不知道楼主目的条带多大，根据引物二聚体位置，推断应该不是很小，根据泳道中目的条带位置判断不可能是跑的时间太短的缘故。最大的可能是marker有问题，所以楼主最好看别人用该marker电泳后的效果再判断。
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10楼2012-09-23 21:57:34
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