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PCR空白跑出了与目的基因一样的一条浅带 已有4人参与
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我最近PCR时，空白跑出了目的基因的条带，不过条带比较浅，阳性对照的比较亮，阴性对照没有。我把枪头，引物，配胶的溶剂以及电泳液都换成新的了，可是还是有条带，哪位好心的大侠指点下，这是哪里出了问题了呀？ PS:以前没有 |
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 核酸生物学实验经验 |
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凌波丽
专家顾问 (知名作家)
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【答案】应助回帖
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楼主的实验结果的可能原因 微量移液器没有过滤膜，也没有消毒棉在微量移液器的杆身与接头之间形成阻塞，导致你在使用微量移液器吸取目的DNA样品液时形成了目的DNA气雾胶，而且DNA气雾胶肯定会残留在微量移液器的杆身里；也必定是DNA污染了阴性对照实验体系造成的，因为其他种类的DNA扩增出来不大可能是在电泳时正好与目的DNA相同，而且多次重复出现。 阴性对照反应体系被目的DNA样品污染，导致了不该出现的DNA扩增带出现。 这种污染的原因与解决方法： （1）在微量移液器的接头和吸杆之间加上脱脂消毒棉花或者购买有滤膜的微量移液器，防止将目的cDNA样品吸入微量移液器内。 （2）除了DNA聚合酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。 （3）所用离心管及样进枪头等均应一次性使用。必要时，在加标本前，反应管和试剂用紫外线照射，以破坏存在的核酸。 （4）使用新的超纯水。 （5）对于PCR实验室充分通风，以防止空气中残留有DNA样品或其他DNA的气溶胶。 （6）有条件的话，把PCR扩增实验和阴性对照实验在不同的实验室完成。 个人意见仅供参考。 |
13楼2014-07-29 23:10:46