24小时热门版块排行榜    

查看: 509  |  回复: 2

sunhengfei

金虫 (小有名气)

[求助] 定点突变PCR结果求指导

第一次做定点突变的PCR,根据Phusion酶的说明书进行加样:13.6μL水+4μL HF buffer+0.8μL质粒模板+0.5/0.5μL正反向引物+0.4μL dNTPs+0.2μL酶;
程序是98℃ 1min,(98℃ 5s,60℃ 15s,72℃ 2min30s)x25,72℃ 10min,10℃保存。
下图为琼脂糖电泳图,1道为MarkerIII,2、3道为平行实验。
请问应该如何摸索条件?

user 2012-09-12 12 小时 49 分钟_副本.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sunhengfei: 金币+20, 有帮助 2012-09-19 21:03:19
根据楼至的延伸时间推断你的目的片段应该在4KB,没有目的条带,这种原因的话 首先可以降低一下退火温度,改为55度,其次换一下酶,Phusion酶保真性高,但是有时候条带就是扩不出来,具体还需要LZ说下条带,TAKAKA 的 LA保真性也是不错了,可以试一下
2楼2012-09-13 18:47:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunhengfei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 无疆@行者 at 2012-09-13 18:47:26
根据楼至的延伸时间推断你的目的片段应该在4KB,没有目的条带,这种原因的话 首先可以降低一下退火温度,改为55度,其次换一下酶,Phusion酶保真性高,但是有时候条带就是扩不出来,具体还需要LZ说下条带,TAKAKA 的 ...

果然是试剂的问题 借用别的实验室Phusion酶试剂盒就成功了 谢谢您了!
3楼2012-09-19 21:02:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sunhengfei 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:43 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 03:40 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:31 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 00:52 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 8/400 2026-08-22 18:29 by 淀粉搬运工
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 让我中一个面上吧! +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见