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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 如何分离这四个峰
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sbkhgmpyud

金虫 (小有名气)

[求助] 如何分离这四个峰

流动相：水相A-10mmol/l四丁基溴化铵；有机相C-甲醇
波长：254nm
色谱柱：C18,；15cm
样品适量，加水溶解
梯度1
时间min        0        5        7        17        20
A        95        75        60        40        0
C        5        25        40        60        100
梯度2
时间        0        5        7        25        30
A        95        75        60        50        40
C        5        25        40        50        60
改变流动相比例，四个峰之间的分离效果没有变化，请问四个峰是同一物质吗？有办法将四个峰分开吗？

1.JPG



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1楼 2012-09-11 15:22:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

简单乐

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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从头开始: 金币+2, 感谢参与 2012-09-11 20:27:04
亲，你的梯度洗脱设的不正确，因为这四个峰出峰时间在9~10.5min内，你应该在这个出峰时间内改变流动相比例，刚开始甲醇比例小，然后逐渐变大，使四种物质分开
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越努力，越幸运
2楼2012-09-11 15:31:19
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michaelye1800

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
从头开始: 金币+1, 感谢参与 2012-09-11 20:27:15
你的C18不错啊 超耐水；
你可以将梯度放缓15min甲醇增加20%，建议梯度先缓后急
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3楼2012-09-11 19:43:37
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普通回帖

张鑫1982

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
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痴夷子皮: 金币+1, 谢谢交流，欢迎常来新药版哦。 2012-09-12 08:12:52
在此时间段增加有机相浓度，并且建议有机相比例不要低于10%。
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如果今天和昨天一样，那么明天又有什么意义？
4楼2012-09-11 20:46:41
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sbkhgmpyud

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 简单乐 at 2012-09-11 15:31:19
亲，你的梯度洗脱设的不正确，因为这四个峰出峰时间在9~10.5min内，你应该在这个出峰时间内改变流动相比例，刚开始甲醇比例小，然后逐渐变大，使四种物质分开

你好，我是这样理解的
图1的梯度1：7-17min甲醇由40%增至60%
图2的梯度2:7-25min甲醇由40%增至50%
甲醇增加的速率在减小，流动相极性变化幅度变小，应该能将极性相近的四个峰分开啊
楼主所说的“因为这四个峰出峰时间在9~10.5min内，你应该在这个出峰时间内改变流动相比例，刚开始甲醇比例小，然后逐渐变大，使四种物质分开”不理解啊，能麻烦帮我设个梯度吗，多谢啊！！
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5楼2012-09-12 08:57:39
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简单乐

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
痴夷子皮: 金币+2, 热心奖励。 2012-09-12 13:29:51
sbkhgmpyud: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-09-13 10:02:24
这四个物质极性非常相似，完全没必要用梯度洗脱，梯度洗脱只适合于分离极性相差很大的物质，使他们保留时间尽可能缩短。由于你这四种物质都在9~11min内出峰，你没有必要用梯度，建议用甲醇调成40%，走等度洗脱，如果不行的话，在慢慢降低甲醇的比例~
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越努力，越幸运
6楼2012-09-12 09:08:04
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gwmgyp

版主 (知名作家)

搬砖将

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
痴夷子皮: 金币+1, 谢谢交流，欢迎常来哦。 2012-09-12 13:30:03
建议5至20分钟保持A：C=75：25
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gwmgyp
7楼2012-09-12 09:12:21
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423673498

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
痴夷子皮: 金币+1, 谢谢交流，欢迎常来哦。 2012-09-12 13:30:16
改成等度洗脱试一下，建议甲醇从40%左右开始。如果还不行就换个长柱子吧
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8楼2012-09-12 11:24:31
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x203x

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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痴夷子皮: 金币+1, 谢谢交流，欢迎常来哦 2012-09-13 08:40:47
可以调节水相的PH值试试，或者换有机相为乙腈分离可能会好一些。
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生活的理想就是为了理想的生活
9楼2012-09-12 14:57:19
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dezhikong

金虫 (小有名气)

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★
感谢参与，应助指数 +1
痴夷子皮: 金币+1, 谢谢交流，欢迎常来哦 2012-09-13 08:40:55
增加离子对的浓度、改变pH值、更换不同品牌的色谱柱。若单纯为分开这四个峰，我也认为不用梯度把
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10楼2012-09-12 17:09:07
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