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e101

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问楼主做的是放线菌么?最后你是怎样处理的?镜检是否有待测菌株?45度水浴过夜是否时间太长?
我做的是放线菌,但对照和待测液OD540值几乎一样大小,请问为什么?
大体步骤:
1.打孔菌株摇床发酵(培养液:几丁质胶体2%,酵母膏0.5%,蛋白胨0.5%,无机盐),3-9天;
2.取发酵液1.5ml,5000rpm离心5min,取上清1.0ml加入1.5ml离心管,再加入0.1ml1%胶体几丁质和0.1mPH6.0磷酸缓冲液,45度水浴120min(对照直接沸水浴灭活10min),然后迅速灭活,15000rpm离心10min;
3.取上清1.0ml加入20ml试管,再加入1.5mlDNS和1.0ml蒸馏水,沸水浴10min,后迅速冷却,补足蒸馏水至8ml,放置20分钟后,测值。
11楼2012-10-31 15:49:28
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麦子绿豆

银虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by e101 at 2012-10-31 15:49:28
请问楼主做的是放线菌么?最后你是怎样处理的?镜检是否有待测菌株?45度水浴过夜是否时间太长?
我做的是放线菌,但对照和待测液OD540值几乎一样大小,请问为什么?
大体步骤:
1.打孔菌株摇床发酵(培养液:几 ...

我是只筛选的细菌
45度过夜是为了防止酶活较低测不到数值,后面可以根据实验结果减少反应时间
步骤我大体也是这样操作的,你的意思是空白跟酶液的OD值一样?那结果是能检测到还原糖还是什么?
另外筛选几丁质降解菌的发酵培养基不建议如此丰富,用LB培养基作为种子培养基,以1:10接种量接种后,发酵培养基可选择1/2LB再加入1%胶体几丁质诱导即可
希望能够互相交流!
12楼2012-10-31 18:50:47
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e101

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 麦子绿豆 at 2012-10-31 18:50:47
我是只筛选的细菌
45度过夜是为了防止酶活较低测不到数值,后面可以根据实验结果减少反应时间
步骤我大体也是这样操作的,你的意思是空白跟酶液的OD值一样?那结果是能检测到还原糖还是什么?
另外筛选几丁质降 ...

谢谢你的耐心回答!
是的,空白跟酶液的OD值几乎一样,OD540值大都在0.02-0.03,检测还原糖。
我做的是放线菌,平时培养用高氏一号培养基,可以用LB作为种子培养基么?发酵培养基可选择1/2LB再加入1%胶体几丁质诱导是设么意思?
13楼2012-11-01 11:49:22
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麦子绿豆

银虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by e101 at 2012-11-01 11:49:22
谢谢你的耐心回答!
是的,空白跟酶液的OD值几乎一样,OD540值大都在0.02-0.03,检测还原糖。
我做的是放线菌,平时培养用高氏一号培养基,可以用LB作为种子培养基么?发酵培养基可选择1/2LB再加入1%胶体几丁质诱 ...

因为你筛得的菌株其酶活并不一定很高,适当延长反应时间是有必要的,你可以尝试一下过夜
我不太了解放线菌,不过肯定是用高氏一号培养基啊,LB常用作细菌的培养基,那你可以尝试下发酵培养基用1/2高氏一号(即其中所有成分的含量均为之前的1/2),再加胶体几丁质至终浓度为1%(w/v)诱导发酵
14楼2012-11-01 20:27:27
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麦子绿豆

银虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by e101 at 2012-11-01 11:49:22
谢谢你的耐心回答!
是的,空白跟酶液的OD值几乎一样,OD540值大都在0.02-0.03,检测还原糖。
我做的是放线菌,平时培养用高氏一号培养基,可以用LB作为种子培养基么?发酵培养基可选择1/2LB再加入1%胶体几丁质诱 ...

不知道检测出来没有?
15楼2012-11-07 10:05:58
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稻草人的学习

银虫 (小有名气)

楼主你好,胶体几丁质的制备方法有很多,请问哪种比较好,最后浓度是怎么确定的?谢谢
16楼2013-10-22 16:55:06
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麦子绿豆

银虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 稻草人的学习 at 2013-10-22 16:55:06
楼主你好,胶体几丁质的制备方法有很多,请问哪种比较好,最后浓度是怎么确定的?谢谢

我使用浓磷酸预处理的方法,效果挺好的。
最后浓度你可以取一定体积的胶体几丁质,然后烘干称重。
17楼2013-10-22 19:37:07
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稻草人的学习

银虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 麦子绿豆 at 2013-10-22 19:37:07
我使用浓磷酸预处理的方法,效果挺好的。
最后浓度你可以取一定体积的胶体几丁质,然后烘干称重。...

谢谢,以后有问题还来向你请教
18楼2013-10-23 14:19:01
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well_想太多

新虫 (小有名气)

请问楼主,你在配制胶体几丁质时采用的是浓盐酸溶解还是磷酸溶解,我看有的文献中在配制时没有用的50%的乙醇,不用可以吗?
19楼2014-02-24 14:31:56
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麦子绿豆

银虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by well_想太多 at 2014-02-24 14:31:56
请问楼主,你在配制胶体几丁质时采用的是浓盐酸溶解还是磷酸溶解,我看有的文献中在配制时没有用的50%的乙醇,不用可以吗?

85% 浓磷酸 这种方法比用乙醇好一些
20楼2014-03-01 12:55:39
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