24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 3679  |  回复: 29
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

麦子绿豆

银虫 (小有名气)

[求助] 几丁质酶测酶活的方法 已有1人参与

小弟在测几丁质酶的酶活,是筛选得到的菌株进行摇瓶发酵后测酶活。
发酵培养基只含有几丁质和一些无机矿物离子,发酵三天后测活。
采用DNS法,1mg/ml的葡萄糖做标准曲线。

问题是:1)阳性对照也没有活性
2)分别对发酵液上清、粗酶液、胞内蛋白进行测活,均没有活性

附测活方法:取上清,加入缓冲液,再加入胶体几丁质,然后45度水浴过夜反应,之后终止反应,测活。以灭火的酶液做对照。

希望高手解答!谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

麦子绿豆

银虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by e101 at 2012-10-31 15:49:28
请问楼主做的是放线菌么?最后你是怎样处理的?镜检是否有待测菌株?45度水浴过夜是否时间太长?
我做的是放线菌,但对照和待测液OD540值几乎一样大小,请问为什么?
大体步骤:
1.打孔菌株摇床发酵(培养液:几 ...

我是只筛选的细菌
45度过夜是为了防止酶活较低测不到数值,后面可以根据实验结果减少反应时间
步骤我大体也是这样操作的,你的意思是空白跟酶液的OD值一样?那结果是能检测到还原糖还是什么?
另外筛选几丁质降解菌的发酵培养基不建议如此丰富,用LB培养基作为种子培养基,以1:10接种量接种后,发酵培养基可选择1/2LB再加入1%胶体几丁质诱导即可
希望能够互相交流!
12楼2012-10-31 18:50:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 30 个回答

爱睡猪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
麦子绿豆: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-11 10:47:39
你确定你发酵之后得到了你要的菌株了 ?做个镜检试试 和你接种的微生物进行对比 看是不是你要的菌株 ,也有可能该微生物没有表达这种酶  ,我们基本都不这么做 如果确定这个微生物产几丁质酶的话 那都是提DNA 测序  然后转大肠杆菌发酵  这种技术比较成熟点
ControlMyself
2楼2012-09-10 16:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

麦子绿豆

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 爱睡猪 at 2012-09-10 16:48:54
你确定你发酵之后得到了你要的菌株了 ?做个镜检试试 和你接种的微生物进行对比 看是不是你要的菌株 ,也有可能该微生物没有表达这种酶  ,我们基本都不这么做 如果确定这个微生物产几丁质酶的话 那都是提DNA 测序  ...

谢谢!但是目前我是想先测得一株酶活较高的再去测序,鉴定。是测酶活这里卡住了,不过即使你说的方法,最后也是需要测酶活的吧~但我也准备尝试一下,谢谢!
3楼2012-09-11 10:47:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

num20062622

银虫 (正式写手)

楼主 我也要测酶活..
但是不是测几丁质酶
是测纤维素酶活
跟果胶酶活性
也是用DNS法。
但是目前我还不是太会
希望楼主能跟我联系 求交流...
可以么 楼主..
4楼2012-09-11 17:43:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 327求调剂 +27 Xxjc1107. 2026-04-13 30/1500 2026-04-19 08:22 by cuisz
[考研] 0854求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-15 27/1350 2026-04-19 01:59 by 烟雨流涯
[考研] 一志愿沪9,326求生物学调剂 +12 刘墨墨 2026-04-13 12/600 2026-04-18 23:31 by 路病情
[考研] 297,工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 化工学硕294分,求导师收留 +33 yzyzx 2026-04-12 37/1850 2026-04-17 23:00 by wunaiy88
[考博] 求博导|生物质基多孔碳/超级电容方向,已有相关成果,寻能源材料/碳材料方向老师 +3 猪猪人Zzz 2026-04-12 3/150 2026-04-17 19:10 by 阳阳阳^_^
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[考研] 一志愿沪9,生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +14 河南农业大学-能 2026-04-14 14/700 2026-04-16 14:41 by dingyanbo1
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 7/350 2026-04-16 14:31 by zhouxiaoyu
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[基金申请] RY:中国产出的科学垃圾论文,绝对数量和比例都世界第一 +7 zju2000 2026-04-14 18/900 2026-04-16 11:36 by 欢乐颂叶蓁
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +4 白云123456789 2026-04-13 4/200 2026-04-16 00:18 by 粉沁若尘
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +19 电气李 2026-04-13 21/1050 2026-04-15 13:37 by 黑科技矿业
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
[考研] B区0809 ,数一英一,290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 302求调剂 +10 易!? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
[考研] 297工科,求调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-12 13/650 2026-04-13 14:12 by dingyanbo1
信息提示
请填处理意见