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几丁质酶测酶活的方法已有1人参与
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小弟在测几丁质酶的酶活，是筛选得到的菌株进行摇瓶发酵后测酶活。 发酵培养基只含有几丁质和一些无机矿物离子，发酵三天后测活。 采用DNS法，1mg/ml的葡萄糖做标准曲线。 问题是：1）阳性对照也没有活性 2）分别对发酵液上清、粗酶液、胞内蛋白进行测活，均没有活性 附测活方法：取上清，加入缓冲液，再加入胶体几丁质，然后45度水浴过夜反应，之后终止反应，测活。以灭火的酶液做对照。 希望高手解答！谢谢！ |
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【答案】应助回帖
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请问楼主做的是放线菌么？最后你是怎样处理的？镜检是否有待测菌株？45度水浴过夜是否时间太长？ 我做的是放线菌，但对照和待测液OD540值几乎一样大小，请问为什么？ 大体步骤： 1.打孔菌株摇床发酵（培养液：几丁质胶体2%，酵母膏0.5%，蛋白胨0.5%，无机盐），3-9天； 2.取发酵液1.5ml，5000rpm离心5min,取上清1.0ml加入1.5ml离心管，再加入0.1ml1%胶体几丁质和0.1mPH6.0磷酸缓冲液，45度水浴120min（对照直接沸水浴灭活10min）,然后迅速灭活，15000rpm离心10min； 3.取上清1.0ml加入20ml试管，再加入1.5mlDNS和1.0ml蒸馏水，沸水浴10min,后迅速冷却，补足蒸馏水至8ml，放置20分钟后，测值。 |
11楼2012-10-31 15:49:28
2楼2012-09-10 16:48:54
3楼2012-09-11 10:47:20
num20062622
银虫 (正式写手)
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4楼2012-09-11 17:43:45