应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 几丁质酶测酶活的方法
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
52/1返回列表
查看: 3594  |  回复: 29
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

麦子绿豆

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 几丁质酶测酶活的方法 已有1人参与

小弟在测几丁质酶的酶活，是筛选得到的菌株进行摇瓶发酵后测酶活。
发酵培养基只含有几丁质和一些无机矿物离子，发酵三天后测活。
采用DNS法，1mg/ml的葡萄糖做标准曲线。

问题是：1）阳性对照也没有活性
2）分别对发酵液上清、粗酶液、胞内蛋白进行测活，均没有活性

附测活方法：取上清，加入缓冲液，再加入胶体几丁质，然后45度水浴过夜反应，之后终止反应，测活。以灭火的酶液做对照。

希望高手解答！谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-09-10 16:18:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

e101

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 麦子绿豆 at 2012-10-31 18:50:47
我是只筛选的细菌
45度过夜是为了防止酶活较低测不到数值，后面可以根据实验结果减少反应时间
步骤我大体也是这样操作的，你的意思是空白跟酶液的OD值一样？那结果是能检测到还原糖还是什么？
另外筛选几丁质降 ...

谢谢你的耐心回答！
是的，空白跟酶液的OD值几乎一样，OD540值大都在0.02-0.03，检测还原糖。
我做的是放线菌，平时培养用高氏一号培养基，可以用LB作为种子培养基么？发酵培养基可选择1/2LB再加入1%胶体几丁质诱导是设么意思？
赞一下 回复此楼
13楼2012-11-01 11:49:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 30 个回答

爱睡猪

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
麦子绿豆: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-11 10:47:39
你确定你发酵之后得到了你要的菌株了 ？做个镜检试试 和你接种的微生物进行对比 看是不是你要的菌株 ，也有可能该微生物没有表达这种酶  ，我们基本都不这么做 如果确定这个微生物产几丁质酶的话 那都是提DNA 测序  然后转大肠杆菌发酵  这种技术比较成熟点
赞一下(1人) 回复此楼
ControlMyself
2楼2012-09-10 16:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

麦子绿豆

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
2楼: Originally posted by 爱睡猪 at 2012-09-10 16:48:54
你确定你发酵之后得到了你要的菌株了 ？做个镜检试试 和你接种的微生物进行对比 看是不是你要的菌株 ，也有可能该微生物没有表达这种酶  ，我们基本都不这么做 如果确定这个微生物产几丁质酶的话 那都是提DNA 测序  ...

谢谢！但是目前我是想先测得一株酶活较高的再去测序，鉴定。是测酶活这里卡住了，不过即使你说的方法，最后也是需要测酶活的吧～但我也准备尝试一下，谢谢！
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-11 10:47:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

num20062622

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
楼主 我也要测酶活..
但是不是测几丁质酶
是测纤维素酶活
跟果胶酶活性
也是用DNS法。
但是目前我还不是太会
希望楼主能跟我联系 求交流...
可以么 楼主..
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-09-11 17:43:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 30 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 285求调剂 +3 FZAC123 2026-03-30 3/150 2026-03-31 17:49 by 热情沙漠
[考研] 080500-315分复试调剂 +9 上岸3821 2026-03-31 9/450 2026-03-31 17:29 by 唐沐儿
[考研] 329求调剂，一志愿西北工业大学，材料工程（085601） +6 小小机灵虫 2026-03-29 12/600 2026-03-31 16:58 by 记事本2026
[考研] 311求调剂 +9 蓝月亮亮 2026-03-30 9/450 2026-03-31 16:32 by yedezhan
[考研] 学硕274求调剂 +17 Li李鱼 2026-03-26 17/850 2026-03-31 15:19 by 客尔美德
[考研] 土木304求调剂 +3 顶级擦擦 2026-03-31 3/150 2026-03-31 13:59 by 西京学院招办
[考研] 354求调剂 +3 lxb598 2026-03-31 4/200 2026-03-31 13:42 by sophie2180
[考研] 一志愿浙江大学工科动力工程370,数一121,专业课135，现在能去哪里 +3 080700调剂 2026-03-30 4/200 2026-03-31 12:00 by KLMY666
[考研] 英一数一408，总分284，二战真诚求调剂 +3 12.27 2026-03-30 5/250 2026-03-31 00:47 by 不吃芒果17
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +9 @taotao 2026-03-29 9/450 2026-03-30 22:29 by 我是小康
[考研] 303求调剂 +7 DLkz1314. 2026-03-30 7/350 2026-03-30 21:07 by peike
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +9 hanamiko 2026-03-27 9/450 2026-03-30 20:10 by 无际的草原
[考研] 环境科学与工程334分求调剂 +6 王一一依依 2026-03-30 8/400 2026-03-30 11:52 by yjolah
[考研] 一志愿北京工业大学，324分求调剂 +6 零八# 2026-03-28 6/300 2026-03-29 21:20 by nanaliuyun
[考研] 291求调剂 +5 Y-cap 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:18 by mumin1990
[考研] 调剂考研 +3 王杰一 2026-03-29 3/150 2026-03-29 08:09 by fmesaito
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-03-27 7/350 2026-03-27 20:59 by AZMK
[考研] 一志愿郑大085600，310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭