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fighter09

木虫 (小有名气)

[交流] 小交流下，怎么证明一个菌里带有某个目的基因

什么方法可以证明一个菌里有目的基因，pcr扩增保守区，southern blot？
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1楼 2012-09-06 18:02:34
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回帖置顶 ( 共有5个 )

lma223

铜虫 (正式写手)
★
fighter09(金币+1): 谢谢参与
挑取菌落做PCR，然后跑胶看大小，如果是目的片段大小，可以进一步提出质粒DNA，拿去做个简单测序就好了。
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5楼2012-09-07 01:14:01
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南海所老龚

新虫 (正式写手)
★
fighter09(金币+1): 谢谢参与
提DNA，用保守引物扩该片段。胶带纯且亮的话直接送去测序，不行的话克隆后菌液测序。再将得到的序列在NCBI上blast，看是否是目的片段。
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7楼2012-09-07 15:06:00
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jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★
fighter09(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-10 13:42:04
有个更加直观的方法，就是根据你的目的基因表达产物的特性来鉴别。

比如，要知道这个菌是否产脂肪酶的话，就可以用含橄榄油（或其它底物）的培养基培养，然后再观察是否有水解圈。

仅仅提供一个思考方向，希望有帮助。
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8楼2012-09-09 16:50:09
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616057157

铜虫 (小有名气)
★
fighter09(金币+1): 谢谢参与
内容已删除
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9楼2012-09-09 17:12:25
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137167741

至尊木虫 (著名写手)
★
fighter09(金币+1): 谢谢参与
第一、菌落PCR
第二、测序
第三、酶切
第四、western blot，假如目的基因表达蛋白的话。
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10楼2012-09-09 22:31:56
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M110899

金虫 (正式写手)
★
fighter09(金币+1): 谢谢参与
菌液PCR
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3楼2012-09-06 21:48:04
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hellokkzhu

木虫 (小有名气)
★
fighter09(金币+1): 谢谢参与
pCR之后测序
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4楼2012-09-06 22:14:23
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baby1987

金虫 (小有名气)
★
fighter09(金币+1): 谢谢参与
菌液pcr。。。。。
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6楼2012-09-07 09:52:02
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简单回复
yingying15882楼
2012-09-06 20:57   回复  
fighter09(金币+1): 谢谢参与
祝福！
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