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alexlihan

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] RNA提取问题

我用于提RNA的植物组织材料在液氮里保存了一个多月,提取的RNA电泳如图(8管均为RNA),这到底是材料本身的原因还是提取过程中出现了问题?求大神指点,小弟不甚感激……

RNA.jpg
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)

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★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-09-05 14:05:50
应该是降解了,正常的应该是28s比是18亮,5s没有或比较暗,这个提的过程中应防止RNase,尤其是研磨的时候,再加裂解液前面,材料不能融化。还有跑胶的时候,被电泳液的水最好也要灭菌,防止跑的过程降解了,我也是刚提了几次,希望对你有帮助,加油,祝实验顺利

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3楼2012-09-05 08:14:40
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

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引用回帖:
6楼: Originally posted by alexlihan at 2012-09-05 09:40:48
我提的RNA是要用做实时定量PCR的,请问提的过程中需要加DNaseⅠ吗?谢谢!...

最好除去DNA,免得后面有影响。我觉得你的不是材料的问题,应该是操作过程中或电泳时RNA降解了。
持之以恒、永不放弃!
7楼2012-09-05 10:31:59
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yananhl

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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在液氮中保存没有问题,我们都是通过在液氮中保存后提的,但是你这个提的量很少啊,不光是降解的问题。
10楼2012-09-05 15:48:32
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普通回帖

yangjianchen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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都降解了,注意在提RNA过程中保持低温。
2楼2012-09-05 00:30:34
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xiaxuel

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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建议用专业的试剂盒提取,操作简便,也可以防止RNA 的降解!我就用试剂盒,可以得到很好的实验结果,建议试试。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2012-09-05 09:07:38
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alexlihan

铁杆木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaxuel at 2012-09-05 09:07:38
建议用专业的试剂盒提取,操作简便,也可以防止RNA 的降解!我就用试剂盒,可以得到很好的实验结果,建议试试。

我也是用试剂盒提的,是不是材料放置太久的原因,在液氮里保存一个多月有没有影响?
5楼2012-09-05 09:37:55
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alexlihan

铁杆木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 追梦的人1987 at 2012-09-05 08:14:40
应该是降解了,正常的应该是28s比是18亮,5s没有或比较暗,这个提的过程中应防止RNase,尤其是研磨的时候,再加裂解液前面,材料不能融化。还有跑胶的时候,被电泳液的水最好也要灭菌,防止跑的过程降解了,我也是刚 ...

我提的RNA是要用做实时定量PCR的,请问提的过程中需要加DNaseⅠ吗?谢谢!
6楼2012-09-05 09:40:48
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by alexlihan at 2012-09-05 09:40:48
我提的RNA是要用做实时定量PCR的,请问提的过程中需要加DNaseⅠ吗?谢谢!...

最好用DNase1消化一下
8楼2012-09-05 13:01:31
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这样的图根本就没办法判断是什么原因;建议分开判定吧。如材料;提取过程;提取方法;电泳等
9楼2012-09-05 13:30:31
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