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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA提取问题
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alexlihan

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] RNA提取问题

我用于提RNA的植物组织材料在液氮里保存了一个多月，提取的RNA电泳如图（8管均为RNA），这到底是材料本身的原因还是提取过程中出现了问题？求大神指点，小弟不甚感激……

RNA.jpg
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1楼 2012-09-04 23:54:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

追梦的人1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-09-05 14:05:50
应该是降解了，正常的应该是28s比是18亮，5s没有或比较暗，这个提的过程中应防止RNase，尤其是研磨的时候，再加裂解液前面，材料不能融化。还有跑胶的时候，被电泳液的水最好也要灭菌，防止跑的过程降解了，我也是刚提了几次，希望对你有帮助，加油，祝实验顺利
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alexlihan
3楼2012-09-05 08:14:40
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
6楼: Originally posted by alexlihan at 2012-09-05 09:40:48
我提的RNA是要用做实时定量PCR的，请问提的过程中需要加DNaseⅠ吗？谢谢！...

最好除去DNA，免得后面有影响。我觉得你的不是材料的问题，应该是操作过程中或电泳时RNA降解了。
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持之以恒、永不放弃！
7楼2012-09-05 10:31:59
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yananhl

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在液氮中保存没有问题，我们都是通过在液氮中保存后提的，但是你这个提的量很少啊，不光是降解的问题。
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10楼2012-09-05 15:48:32
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普通回帖

yangjianchen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
都降解了，注意在提RNA过程中保持低温。
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2楼2012-09-05 00:30:34
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xiaxuel

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议用专业的试剂盒提取，操作简便，也可以防止RNA 的降解！我就用试剂盒，可以得到很好的实验结果，建议试试。
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alexlihan
4楼2012-09-05 09:07:38
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alexlihan

铁杆木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaxuel at 2012-09-05 09:07:38
建议用专业的试剂盒提取，操作简便，也可以防止RNA 的降解！我就用试剂盒，可以得到很好的实验结果，建议试试。

我也是用试剂盒提的，是不是材料放置太久的原因，在液氮里保存一个多月有没有影响？
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5楼2012-09-05 09:37:55
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alexlihan

铁杆木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 追梦的人1987 at 2012-09-05 08:14:40
应该是降解了，正常的应该是28s比是18亮，5s没有或比较暗，这个提的过程中应防止RNase，尤其是研磨的时候，再加裂解液前面，材料不能融化。还有跑胶的时候，被电泳液的水最好也要灭菌，防止跑的过程降解了，我也是刚 ...

我提的RNA是要用做实时定量PCR的，请问提的过程中需要加DNaseⅠ吗？谢谢！
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6楼2012-09-05 09:40:48
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by alexlihan at 2012-09-05 09:40:48
我提的RNA是要用做实时定量PCR的，请问提的过程中需要加DNaseⅠ吗？谢谢！...

最好用DNase1消化一下
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8楼2012-09-05 13:01:31
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junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这样的图根本就没办法判断是什么原因；建议分开判定吧。如材料；提取过程；提取方法；电泳等
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9楼2012-09-05 13:30:31
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