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Lynn和Mia

金虫 (小有名气)

[求助] 求助求助~~设计引物有多少分类?分别适用于什么情况?

各位实验达人,我最近在做real time PCR,先提取总mRNA,再反转录成单链cDNA,最后做荧光定量PCR,最近设计引物的时候发现有人说的什么设计跨内含子的引物,我就不太明白了,希望各位达人给予解惑,什么是跨内含子的引物?为什么要设计这样的引物?引物设计有哪些分类?我应该设计哪一种引物呢?非常困惑+迷茫ing~~~望指教~~~非常感谢O(∩_∩)O哈!
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Lynn和Mia

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by chnfhjxl at 2012-11-14 13:34:12
个人认为,跨内含子引物,就是说是说上游引物或者下游引物中的一条同时落在两个外显子上,不含有内含子序列,因为mRNA不含有内含子,这样设计的引物只能检测出mRNA,而不能检测出基因组,对mRNA的定量就相对准确。所 ...

你的回答很准确呀,我后来自己搞懂了,但还是谢谢你的解答
5楼2012-11-15 09:48:47
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Lynn和Mia

金虫 (小有名气)

木有人咩?坐沙发继续等
2楼2012-09-03 14:49:35
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xh928814

银虫 (正式写手)

我只做过半定量的,我也不知道啊1
想要超越别人,就要超越自己,我有我可以!
3楼2012-11-13 15:52:43
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chnfhjxl

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+4, 鼓励应助 2012-11-14 16:29:44
Lynn和Mia: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-11-15 09:49:41
个人认为,跨内含子引物,就是说是说上游引物或者下游引物中的一条同时落在两个外显子上,不含有内含子序列,因为mRNA不含有内含子,这样设计的引物只能检测出mRNA,而不能检测出基因组,对mRNA的定量就相对准确。所以设计引物的时候就要限定一下上下游引物的位置了。
至于引物种类,这个问题我不怎么明白你要问的是什么,荧光定量的引物设计原则很多地方都可以搜到的。祝你好运吧
4楼2012-11-14 13:34:12
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