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anhongxue

金虫 (初入文坛)

[求助] 质粒转化农杆菌

质粒转化农杆菌后,挑取单菌落摇菌(用的是YEB培养基),具有卡那和利福平抗性,但是摇菌后菌液的颜色是酱色,我看别人摇出来的菌都是黄色的,为什么我的菌液颜色就那么深啊!有没有遇到过同类问题的虫友。解释一下原因,谢谢!
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珊宝儿

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-12 15:47:56
我摇出来的是葡萄紫然后变黄的,是不是你的菌,没摇到所需OD啊?还是无论怎么摇都是酱色啊?你们实验室其他人和你用的利福平是一样的吗?不错我是做转基因苗的,可能也不太一样,不过也是用农杆菌侵染
9楼2012-10-12 15:15:46
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anhongxue

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 珊宝儿 at 2012-10-12 15:15:46
我摇出来的是葡萄紫然后变黄的,是不是你的菌,没摇到所需OD啊?还是无论怎么摇都是酱色啊?你们实验室其他人和你用的利福平是一样的吗?不错我是做转基因苗的,可能也不太一样,不过也是用农杆菌侵染

确实是没有达到所需要的OD值,我后来又延长摇菌时间了,颜色就变浅了。
11楼2012-10-12 16:37:24
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是你的利福平浓度过大了,你下次可以试一下将利福平浓度减半!
持之以恒、永不放弃!
2楼2012-08-31 11:21:08
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
利福平是不是没有溶解好,你看一看是不是你的利福平颗粒很多。抗性一般卡那和利福平是千分之一比例。
3楼2012-08-31 11:33:48
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anhongxue

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-08-31 11:21:08
可能是你的利福平浓度过大了,你下次可以试一下将利福平浓度减半!

应该不会的,我用的Rif是100ng/ul用DMSO溶解的,20ml YEB中加入了20ul的Rif,应该不会大吧!再有就是我们实验室别人摇的都是黄色的,就我的颜色发黑。
4楼2012-08-31 14:57:26
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anhongxue

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by peitaokong at 2012-08-31 11:33:48
利福平是不是没有溶解好,你看一看是不是你的利福平颗粒很多。抗性一般卡那和利福平是千分之一比例。

那你们的利福平是怎么配的呢?
5楼2012-08-31 15:03:29
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用甲醇溶解的50mg/ml,反正转苗效果还不错的。
6楼2012-08-31 19:47:22
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你们实验室rif用的都是这个浓度吗。我感觉是不是有点儿低了,抗性不足,染了杂菌了。
7楼2012-08-31 19:51:59
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anhongxue

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by peitaokong at 2012-08-31 19:51:59
你们实验室rif用的都是这个浓度吗。我感觉是不是有点儿低了,抗性不足,染了杂菌了。

写错了,是100ug/ul,终浓度是100ng/ul。
8楼2012-09-01 15:19:49
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银虫 (著名写手)

请问你的质粒是怎么来的?
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10楼2012-10-12 16:01:03
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