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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 质粒转化农杆菌
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anhongxue

金虫 (初入文坛)

[求助] 质粒转化农杆菌

质粒转化农杆菌后，挑取单菌落摇菌（用的是YEB培养基），具有卡那和利福平抗性，但是摇菌后菌液的颜色是酱色，我看别人摇出来的菌都是黄色的，为什么我的菌液颜色就那么深啊！有没有遇到过同类问题的虫友。解释一下原因，谢谢！
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1楼 2012-08-31 10:02:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

珊宝儿

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-12 15:47:56
我摇出来的是葡萄紫然后变黄的，是不是你的菌，没摇到所需OD啊？还是无论怎么摇都是酱色啊？你们实验室其他人和你用的利福平是一样的吗？不错我是做转基因苗的，可能也不太一样，不过也是用农杆菌侵染
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9楼2012-10-12 15:15:46
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anhongxue

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 珊宝儿 at 2012-10-12 15:15:46
我摇出来的是葡萄紫然后变黄的，是不是你的菌，没摇到所需OD啊？还是无论怎么摇都是酱色啊？你们实验室其他人和你用的利福平是一样的吗？不错我是做转基因苗的，可能也不太一样，不过也是用农杆菌侵染

确实是没有达到所需要的OD值，我后来又延长摇菌时间了，颜色就变浅了。
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11楼2012-10-12 16:37:24
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普通回帖

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是你的利福平浓度过大了，你下次可以试一下将利福平浓度减半！
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持之以恒、永不放弃！
2楼2012-08-31 11:21:08
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
利福平是不是没有溶解好，你看一看是不是你的利福平颗粒很多。抗性一般卡那和利福平是千分之一比例。
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3楼2012-08-31 11:33:48
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anhongxue

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-08-31 11:21:08
可能是你的利福平浓度过大了，你下次可以试一下将利福平浓度减半！

应该不会的，我用的Rif是100ng/ul用DMSO溶解的，20ml YEB中加入了20ul的Rif，应该不会大吧！再有就是我们实验室别人摇的都是黄色的，就我的颜色发黑。
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4楼2012-08-31 14:57:26
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anhongxue

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by peitaokong at 2012-08-31 11:33:48
利福平是不是没有溶解好，你看一看是不是你的利福平颗粒很多。抗性一般卡那和利福平是千分之一比例。

那你们的利福平是怎么配的呢？
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5楼2012-08-31 15:03:29
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用甲醇溶解的50mg/ml，反正转苗效果还不错的。
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6楼2012-08-31 19:47:22
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你们实验室rif用的都是这个浓度吗。我感觉是不是有点儿低了，抗性不足，染了杂菌了。
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7楼2012-08-31 19:51:59
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anhongxue

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by peitaokong at 2012-08-31 19:51:59
你们实验室rif用的都是这个浓度吗。我感觉是不是有点儿低了，抗性不足，染了杂菌了。

写错了，是100ug/ul，终浓度是100ng/ul。
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8楼2012-09-01 15:19:49
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review

银虫 (著名写手)
请问你的质粒是怎么来的？
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交流
10楼2012-10-12 16:01:03
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