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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 有没有人做过酶谱电泳呢？请教下
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胡小喜

新虫 (小有名气)

[求助] 有没有人做过酶谱电泳呢？请教下

最近要做蛋白酶的酶谱电泳。有一种方法就是先做一块常规蛋白酶的酶谱电泳凝胶，另外配置一个酪蛋白凝胶，然后把第一块压倒第二块上水解酪蛋白，但是实验中由于压在一块，酪蛋白凝胶拿起来就破了！令看资料有一种方法是就制作一块凝胶，在凝胶中加0.01%的明胶，不知道是怎么操作的，是用水把明胶制成0.01%的溶液在加到常规的胶液混合吗，还是把明胶固体加到凝胶液里，明胶不是很难溶解吗？是怎么做到的？一般明胶要加多少量啊，望有经验的人指导下cat39:
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1楼 2012-08-24 20:42:12
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+5, MicEPI+1, 鼓励交流 2012-08-25 07:54:02
取粗酶液样品跑一块非变性聚丙烯酰胺凝胶，溴酚蓝到胶的末端，使得蛋白质能分得开但又没有跑出去。制作一块琼脂糖平板，含有适量底物，不一定需要用培养基来做，就是含有能显色物质的固体平板就行了。把非变性胶贴在平板上，在特定的温度下孵育一定时间。胶里的蛋白质会扩散一部分到平板里，降解底物，显色。

我的是alpha淀粉酶，平板有琼脂粉、淀粉、曲利苯蓝和水，可以形成一条略显红色的降解带。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2012-08-24 23:54:00
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胡小喜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-08-24 23:54:00
取粗酶液样品跑一块非变性聚丙烯酰胺凝胶，溴酚蓝到胶的末端，使得蛋白质能分得开但又没有跑出去。制作一块琼脂糖平板，含有适量底物，不一定需要用培养基来做，就是含有能显色物质的固体平板就行了。把非变性胶贴在 ...

谢谢！
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3楼2012-09-03 18:53:36
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胡小喜

新虫 (小有名气)
胡小喜: 回帖置顶 2012-09-06 19:48:48
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-08-24 23:54:00
取粗酶液样品跑一块非变性聚丙烯酰胺凝胶，溴酚蓝到胶的末端，使得蛋白质能分得开但又没有跑出去。制作一块琼脂糖平板，含有适量底物，不一定需要用培养基来做，就是含有能显色物质的固体平板就行了。把非变性胶贴在 ...

如若我要进行蛋白酶谱，是要在琼脂糖里加酪蛋白，考马斯亮蓝吗，都融在一块做成一块胶吗？还是考马斯亮蓝溶液浸泡盖在一块酪蛋白琼脂凝胶和非变性聚丙烯酰胺凝胶吗？
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4楼2012-09-03 19:03:27
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jxqwj

金虫 (著名写手)
二楼的老师能否发个酶谱检测的具体的步骤啊？急需要啊，谢谢
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5楼2012-09-04 11:45:48
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