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胡小喜

新虫 (小有名气)

[求助] 有没有人做过酶谱电泳呢?请教下

最近要做蛋白酶的酶谱电泳。有一种方法就是先做一块常规蛋白酶的酶谱电泳凝胶,另外配置一个酪蛋白凝胶,然后把第一块压倒第二块上水解酪蛋白,但是实验中由于压在一块,酪蛋白凝胶拿起来就破了!令看资料有一种方法是就制作一块凝胶,在凝胶中加0.01%的明胶,不知道是怎么操作的,是用水把明胶制成0.01%的溶液在加到常规的胶液混合吗,还是把明胶固体加到凝胶液里,明胶不是很难溶解吗?是怎么做到的?一般明胶要加多少量啊,望有经验的人指导下cat39:
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+5, MicEPI+1, 鼓励交流 2012-08-25 07:54:02
取粗酶液样品跑一块非变性聚丙烯酰胺凝胶,溴酚蓝到胶的末端,使得蛋白质能分得开但又没有跑出去。制作一块琼脂糖平板,含有适量底物,不一定需要用培养基来做,就是含有能显色物质的固体平板就行了。把非变性胶贴在平板上,在特定的温度下孵育一定时间。胶里的蛋白质会扩散一部分到平板里,降解底物,显色。

我的是alpha淀粉酶,平板有琼脂粉、淀粉、曲利苯蓝和水,可以形成一条略显红色的降解带。


流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2012-08-24 23:54:00
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