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胡小喜

新虫 (小有名气)

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[求助] 有没有人做过酶谱电泳呢？请教下

最近要做蛋白酶的酶谱电泳。有一种方法就是先做一块常规蛋白酶的酶谱电泳凝胶，另外配置一个酪蛋白凝胶，然后把第一块压倒第二块上水解酪蛋白，但是实验中由于压在一块，酪蛋白凝胶拿起来就破了！令看资料有一种方法是就制作一块凝胶，在凝胶中加0.01%的明胶，不知道是怎么操作的，是用水把明胶制成0.01%的溶液在加到常规的胶液混合吗，还是把明胶固体加到凝胶液里，明胶不是很难溶解吗？是怎么做到的？一般明胶要加多少量啊，望有经验的人指导下cat39:

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1楼 2012-08-24 20:42:12

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冼亮淀粉酶

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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rainwander: 金币+5, MicEPI+1, 鼓励交流 2012-08-25 07:54:02

取粗酶液样品跑一块非变性聚丙烯酰胺凝胶，溴酚蓝到胶的末端，使得蛋白质能分得开但又没有跑出去。制作一块琼脂糖平板，含有适量底物，不一定需要用培养基来做，就是含有能显色物质的固体平板就行了。把非变性胶贴在平板上，在特定的温度下孵育一定时间。胶里的蛋白质会扩散一部分到平板里，降解底物，显色。

我的是alpha淀粉酶，平板有琼脂粉、淀粉、曲利苯蓝和水，可以形成一条略显红色的降解带。

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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。

2楼2012-08-24 23:54:00

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