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lecou

新虫 (初入文坛)

[求助] 求大师指导下~最近一个月都在重复插目的片段可是结果很奇怪啊~

我用的是穿梭质粒ycp50,8k左右,用的bamH1 和hind3双酶切,将一个目的片段大约6k的插进去,可是已经做了一个月了,开始做双酶切和单酶切进行验证,但是都没有出现十几k的目的质粒,前几天设计了引物,pcr目的片段中的一段,约800bp,出现了目的条带,可是酶切确实阴性结果,这是怎么了?说的有点多,不知道能不能理解,希望高手指点下,不懂得细节再交流~
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希望自己能平常心面对实验中的种种
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 辛苦了 2012-08-30 14:36:22
单酶切14K你能看到?一般用marker最大只有10K。
双酶切试试吧
不过片段比较大,体系选择恰当些,不行就该酶切体系。只能酶切验证了!

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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2012-08-29 21:07:38
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lecou

新虫 (初入文坛)

顶一下,怎么没人回啊,大家帮帮忙嘿嘿
希望自己能平常心面对实验中的种种
2楼2012-08-29 14:31:29
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三十不惑

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的PCR使用阴性对照了吗?你先排除一下PCR反应的假阳性吧

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3楼2012-08-29 20:08:01
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王礼鹏

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-30 14:36:31
你的片段是有点大,你确定下你双酶是否在目的片段中也有酶切位点?或者换下酶切体系,酶切过夜。。。。。。祝实验顺利!!!

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5楼2012-08-30 09:31:21
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