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求大师指导下~最近一个月都在重复插目的片段可是结果很奇怪啊~
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| 我用的是穿梭质粒ycp50，8k左右，用的bamH1 和hind3双酶切，将一个目的片段大约6k的插进去，可是已经做了一个月了，开始做双酶切和单酶切进行验证，但是都没有出现十几k的目的质粒，前几天设计了引物，pcr目的片段中的一段，约800bp，出现了目的条带，可是酶切确实阴性结果，这是怎么了？说的有点多，不知道能不能理解，希望高手指点下，不懂得细节再交流~ |
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