应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求大师指导下~最近一个月都在重复插目的片段可是结果很奇怪啊~
81/1返回列表
查看: 822  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lecou

新虫 (初入文坛)

[求助] 求大师指导下~最近一个月都在重复插目的片段可是结果很奇怪啊~

我用的是穿梭质粒ycp50，8k左右，用的bamH1 和hind3双酶切，将一个目的片段大约6k的插进去，可是已经做了一个月了，开始做双酶切和单酶切进行验证，但是都没有出现十几k的目的质粒，前几天设计了引物，pcr目的片段中的一段，约800bp，出现了目的条带，可是酶切确实阴性结果，这是怎么了？说的有点多，不知道能不能理解，希望高手指点下，不懂得细节再交流~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
希望自己能平常心面对实验中的种种
1楼 2012-08-24 18:11:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lecou

新虫 (初入文坛)
顶一下，怎么没人回啊，大家帮帮忙嘿嘿
赞一下 回复此楼
希望自己能平常心面对实验中的种种
2楼2012-08-29 14:31:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三十不惑

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的PCR使用阴性对照了吗？你先排除一下PCR反应的假阳性吧
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

lecou
个性签名
3楼2012-08-29 20:08:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 辛苦了 2012-08-30 14:36:22
单酶切14K你能看到？一般用marker最大只有10K。
双酶切试试吧
不过片段比较大，体系选择恰当些，不行就该酶切体系。只能酶切验证了！
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

lecou
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2012-08-29 21:07:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王礼鹏

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-30 14:36:31
你的片段是有点大，你确定下你双酶是否在目的片段中也有酶切位点？或者换下酶切体系，酶切过夜。。。。。。祝实验顺利！！！
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

lecou
5楼2012-08-30 09:31:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lecou

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 三十不惑 at 2012-08-29 20:08:01
你的PCR使用阴性对照了吗？你先排除一下PCR反应的假阳性吧

阴性对照阳性对照都有，结果也都正常，做了好几遍的pcr验证都一样~
赞一下 回复此楼
希望自己能平常心面对实验中的种种
6楼2012-08-31 14:12:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lecou

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 天使托 at 2012-08-29 21:07:38
单酶切14K你能看到？一般用marker最大只有10K。
双酶切试试吧
不过片段比较大，体系选择恰当些，不行就该酶切体系。只能酶切验证了！

我们实验室有15k的maker，就是要跑久一点才能分开的清楚。一直在尝试各种酶切体系，不过转化只酶切空对照看酶切的都挺完全的，谢啦~
赞一下 回复此楼
希望自己能平常心面对实验中的种种
7楼2012-08-31 14:15:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lecou

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王礼鹏 at 2012-08-30 09:31:21
你的片段是有点大，你确定下你双酶是否在目的片段中也有酶切位点？或者换下酶切体系，酶切过夜。。。。。。祝实验顺利！！！

我也确认过酶切位点没问题，尝试下酶切久一点~谢谢
赞一下 回复此楼
希望自己能平常心面对实验中的种种
8楼2012-08-31 14:17:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lecou 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 07化学280分求调剂 +6 722865 2026-03-23 6/300 2026-03-24 20:58 by allen-yin
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 305分求调剂（食品工程） +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 081700 调剂 267分 +9 迷人的哈哈 2026-03-23 9/450 2026-03-24 11:58 by 544594351
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123！
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 286求调剂 +10 Faune 2026-03-21 10/500 2026-03-21 23:34 by 314126402
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭