24小时热门版块排行榜    

查看: 811  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lecou

新虫 (初入文坛)

[求助] 求大师指导下~最近一个月都在重复插目的片段可是结果很奇怪啊~

我用的是穿梭质粒ycp50,8k左右,用的bamH1 和hind3双酶切,将一个目的片段大约6k的插进去,可是已经做了一个月了,开始做双酶切和单酶切进行验证,但是都没有出现十几k的目的质粒,前几天设计了引物,pcr目的片段中的一段,约800bp,出现了目的条带,可是酶切确实阴性结果,这是怎么了?说的有点多,不知道能不能理解,希望高手指点下,不懂得细节再交流~
回复此楼
希望自己能平常心面对实验中的种种
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lecou

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王礼鹏 at 2012-08-30 09:31:21
你的片段是有点大,你确定下你双酶是否在目的片段中也有酶切位点?或者换下酶切体系,酶切过夜。。。。。。祝实验顺利!!!

我也确认过酶切位点没问题,尝试下酶切久一点~谢谢
希望自己能平常心面对实验中的种种
8楼2012-08-31 14:17:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

lecou

新虫 (初入文坛)

顶一下,怎么没人回啊,大家帮帮忙嘿嘿
希望自己能平常心面对实验中的种种
2楼2012-08-29 14:31:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三十不惑

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的PCR使用阴性对照了吗?你先排除一下PCR反应的假阳性吧

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

个性签名
3楼2012-08-29 20:08:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 辛苦了 2012-08-30 14:36:22
单酶切14K你能看到?一般用marker最大只有10K。
双酶切试试吧
不过片段比较大,体系选择恰当些,不行就该酶切体系。只能酶切验证了!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2012-08-29 21:07:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工 264分各科过A区国家线 +3 哈哈157349 2026-03-21 3/150 2026-03-24 14:11 by zhyzzh
[考研] 277分求调剂,跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 081700 调剂 267分 +9 迷人的哈哈 2026-03-23 9/450 2026-03-24 11:58 by 544594351
[考研] 284求调剂 +10 Zhao anqi 2026-03-22 10/500 2026-03-24 00:08 by Equinoxhua
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 一志愿陕师大生物学071000,298分,求调剂 +3 SYA! 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:09 by macy2011
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 求调剂材料学硕080500,总分289分 5+3 @taotao 2026-03-19 21/1050 2026-03-23 10:17 by 冠c哥
[考研] 291求调剂 +5 孅華 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见