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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取
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刁寒冰

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取

有用过天根小题中量质粒试剂盒的虫友没？之前说是可以提取质粒的浓度和质量比较好的，可是我提了2次，浓度都很低，而且A260/A280的比值都不对呢？不知是怎样弄啊？
之前也查过一些资料，说是注意细节之类的，我做的时候也很注意了，怎么还是不行啊？我用的菌是里氏杆菌

[ Last edited by 1949stone on 2012-8-22 at 07:23 ]
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1楼 2012-08-21 21:11:16
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hutingting

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们用过，不过是提的大肠杆菌，每次结果都还不错，过夜培养的菌液，按照说明书一步一步来，没什么问题
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2楼2012-08-22 08:54:40
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-22 15:19:50
我也用过呢，提的是大肠的。效果还挺好的呢。不过没有测过吸光度。直接就用了。比较关键的事加入溶液3后西区上清液不要吸入沉淀。
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3楼2012-08-22 09:34:36
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-22 15:19:58
建议先确认一下菌里面是不是真的有质粒，可以做一下菌落PCR试试；或者你提取的是不是质粒，可能是基因组的降解物；我之前有过一次悲剧的结果，后来证实是10Xloading buffer的问题。
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4楼2012-08-22 10:43:26
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刁寒冰

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huangguoqing at 2012-08-22 10:43:26
建议先确认一下菌里面是不是真的有质粒，可以做一下菌落PCR试试；或者你提取的是不是质粒，可能是基因组的降解物；我之前有过一次悲剧的结果，后来证实是10Xloading buffer的问题。

我之前用别的牌子的提过这个菌，也是浓度有点低，但是有的啊？
在提取过程中怎么会是10Xloading buffer的问题呢？我的过程中没有用到额
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5楼2012-08-22 11:27:44
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刁寒冰

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by piaoyunokok at 2012-08-22 09:34:36
我也用过呢，提的是大肠的。效果还挺好的呢。不过没有测过吸光度。直接就用了。比较关键的事加入溶液3后西区上清液不要吸入沉淀。

嗯，在这个步骤的时候 我已经很注意了，还是不行滴
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6楼2012-08-22 11:36:12
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M110935

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也用过天根的，感觉没有Takara的好
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7楼2012-08-22 11:44:44
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刁寒冰

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hutingting at 2012-08-22 08:54:40
我们用过，不过是提的大肠杆菌，每次结果都还不错，过夜培养的菌液，按照说明书一步一步来，没什么问题

请问一下，你用的是多大的菌夜量离心的？加入P2溶液后，说明书是菌夜变清亮粘稠？真不知这个清亮是到什么程度呢？
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8楼2012-08-22 15:03:57
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刁寒冰

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by M110935 at 2012-08-22 11:44:44
我也用过天根的，感觉没有Takara的好

没有用过takara的额，所以不是很清楚
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9楼2012-08-22 15:04:56
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by huangguoqing at 2012-08-22 10:43:26
建议先确认一下菌里面是不是真的有质粒，可以做一下菌落PCR试试；或者你提取的是不是质粒，可能是基因组的降解物；我之前有过一次悲剧的结果，后来证实是10Xloading buffer的问题。

电泳鉴定的时候你是用核酸蛋白分析仪测的还是琼脂糖电泳？还有我想问一下，你的质粒有多大？
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10楼2012-08-22 15:56:48
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