8楼: Originally posted by 刁寒冰 at 2012-08-22 15:03:57
请问一下，你用的是多大的菌夜量离心的？加入P2溶液后，说明书是菌夜变清亮粘稠？真不知这个清亮是到什么程度呢？...

12楼: Originally posted by hutingting at 2012-08-23 08:39:32
我们一般是过夜培养，前一天晚上6点左右摇上，第二天八点多开始提质粒 ，小提的质粒，一般用3-4毫升菌液，裂解菌液是完全浑浊的，加完P2之后，菌液会变的清亮，但不是无色透明的，只是不浑浊...

11楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-22 17:05:53
楼主，提质粒之前每一步都要监测。
在连接之前，确保回收片段是成功的。
在转化之后，菌落PCR，用你的引物和通用引物，确保挑取的单菌落时正确的。如果都没有问题，提取质粒就按照试剂盒操作就OK了。
如果比值不 ...

10楼: Originally posted by huangguoqing at 2012-08-22 15:56:48
电泳鉴定的时候你是用核酸蛋白分析仪测的还是琼脂糖电泳？还有我想问一下，你的质粒有多大？...

14楼: Originally posted by 刁寒冰 at 2012-08-23 10:40:53
之前我一直都是按照试剂盒直接提的，但就是浓度太低了，没法进行后面的实验，还在找找原因呢？
试剂盒提取的质粒，一般跑胶多大分子量呢？有时候都是两条或三条带呢？...

16楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-23 21:37:40
质粒跑胶2条三条带都是正常的，我们无法知道其高级结构的情况。质粒跑胶只是确定质粒是提出来了的以及其粗略浓度大小。用单双酶切同时鉴定结果会比较准确。...

17楼: Originally posted by 刁寒冰 at 2012-08-23 21:59:22
嗯 但有时候浓度太低的话 我跑胶的时候都没有条带的！...

13楼: Originally posted by 刁寒冰 at 2012-08-23 10:38:49
我也是过夜培养细菌，加入P2溶液后，也是没有透明，只是比之前清亮了，那我就真搞不懂我是哪边出问题了呢？那你们一般提出质粒的浓度多少啊？A260/280怎样？用质粒直接跑胶吗？结果怎样？...

13楼: Originally posted by 刁寒冰 at 2012-08-23 10:38:49
我也是过夜培养细菌，加入P2溶液后，也是没有透明，只是比之前清亮了，那我就真搞不懂我是哪边出问题了呢？那你们一般提出质粒的浓度多少啊？A260/280怎样？用质粒直接跑胶吗？结果怎样？...