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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取
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刁寒冰

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取

有用过天根小题中量质粒试剂盒的虫友没？之前说是可以提取质粒的浓度和质量比较好的，可是我提了2次，浓度都很低，而且A260/A280的比值都不对呢？不知是怎样弄啊？
之前也查过一些资料，说是注意细节之类的，我做的时候也很注意了，怎么还是不行啊？我用的菌是里氏杆菌

[ Last edited by 1949stone on 2012-8-22 at 07:23 ]
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1楼 2012-08-21 21:11:16
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by 刁寒冰 at 2012-08-23 10:40:53
之前我一直都是按照试剂盒直接提的，但就是浓度太低了，没法进行后面的实验，还在找找原因呢？
试剂盒提取的质粒，一般跑胶多大分子量呢？有时候都是两条或三条带呢？...

质粒跑胶2条三条带都是正常的，我们无法知道其高级结构的情况。质粒跑胶只是确定质粒是提出来了的以及其粗略浓度大小。用单双酶切同时鉴定结果会比较准确。
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16楼2012-08-23 21:37:40
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hutingting

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们用过，不过是提的大肠杆菌，每次结果都还不错，过夜培养的菌液，按照说明书一步一步来，没什么问题
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2楼2012-08-22 08:54:40
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-22 15:19:50
我也用过呢，提的是大肠的。效果还挺好的呢。不过没有测过吸光度。直接就用了。比较关键的事加入溶液3后西区上清液不要吸入沉淀。
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3楼2012-08-22 09:34:36
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-22 15:19:58
建议先确认一下菌里面是不是真的有质粒，可以做一下菌落PCR试试；或者你提取的是不是质粒，可能是基因组的降解物；我之前有过一次悲剧的结果，后来证实是10Xloading buffer的问题。
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4楼2012-08-22 10:43:26
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