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刁寒冰

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取

有用过天根小题中量质粒试剂盒的虫友没?之前说是可以提取质粒的浓度和质量比较好的,可是我提了2次,浓度都很低,而且A260/A280的比值都不对呢?不知是怎样弄啊?
之前也查过一些资料,说是注意细节之类的,我做的时候也很注意了,怎么还是不行啊?我用的菌是里氏杆菌

[ Last edited by 1949stone on 2012-8-22 at 07:23 ]
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hutingting

银虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 刁寒冰 at 2012-08-23 10:38:49
我也是过夜培养细菌,加入P2溶液后,也是没有透明,只是比之前清亮了,那我就真搞不懂我是哪边出问题了呢?那你们一般提出质粒的浓度多少啊?A260/280怎样?用质粒直接跑胶吗?结果怎样?...

浓度一般是200ng/ul,50ul洗脱,260/280一般在1.8-2.1之间,电泳有时候一条带,有时候两条带,都正常,重要的是后面要做酶切验证质粒正确与否。
20楼2012-08-24 08:43:26
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hutingting

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们用过,不过是提的大肠杆菌,每次结果都还不错,过夜培养的菌液,按照说明书一步一步来,没什么问题
2楼2012-08-22 08:54:40
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-22 15:19:50
我也用过呢,提的是大肠的。效果还挺好的呢。不过没有测过吸光度。直接就用了。比较关键的事加入溶液3后西区上清液不要吸入沉淀。
3楼2012-08-22 09:34:36
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-22 15:19:58
建议先确认一下菌里面是不是真的有质粒,可以做一下菌落PCR试试;或者你提取的是不是质粒,可能是基因组的降解物;我之前有过一次悲剧的结果,后来证实是10Xloading buffer的问题。
4楼2012-08-22 10:43:26
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