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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取
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hutingting

银虫 (正式写手)
浓度一般是200ng/ul，50ul洗脱，260/280一般在1.8-2.1之间，电泳有时候一条带，有时候两条带，都正常，重要的是后面要做酶切验证质粒正确与否。
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21楼2012-08-24 08:44:16
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刁寒冰

银虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by hutingting at 2012-08-24 08:41:13
我们一般提的质粒的浓度在200ng/ul左右，用50ul洗脱，A260/280一般都在1.8-2.1之间，一般取1ul质粒跑胶，有时候一条带，有时候两条带，这都正常...

嗯，看来你们提的浓度还是可以的，我再重新试一下，看这次能不能浓度高点
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22楼2012-08-24 09:30:39
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刁寒冰

银虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by hutingting at 2012-08-24 08:43:26
浓度一般是200ng/ul，50ul洗脱，260/280一般在1.8-2.1之间，电泳有时候一条带，有时候两条带，都正常，重要的是后面要做酶切验证质粒正确与否。...

我只是提出质粒来，要做southern，不用酶切
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23楼2012-08-24 09:31:12
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by 刁寒冰 at 2012-08-23 10:45:45
我用的是琼脂糖电泳，用质粒直接加10Xloading buffer电泳吧？但一直都没提出来呢，所以跑胶都没结果呢，我也不确定质粒多大了...

质粒多大不确定？你提取质粒的目的是什么？下一步要做什么呢？
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24楼2012-08-24 10:00:32
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刁寒冰

银虫 (小有名气)
引用回帖:
24楼: Originally posted by huangguoqing at 2012-08-24 10:00:32
质粒多大不确定？你提取质粒的目的是什么？下一步要做什么呢？...

就是看一下质粒大小，之后要做southern
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25楼2012-08-24 10:05:22
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hutingting

银虫 (正式写手)
引用回帖:
23楼: Originally posted by 刁寒冰 at 2012-08-24 09:31:12
我只是提出质粒来，要做southern，不用酶切...

酶切只是验证质粒对不对
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26楼2012-08-24 14:57:47
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刁寒冰

银虫 (小有名气)
引用回帖:
24楼: Originally posted by huangguoqing at 2012-08-24 10:00:32
质粒多大不确定？你提取质粒的目的是什么？下一步要做什么呢？...

提质粒，做southern杂交，那个要求浓度和质量
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27楼2012-08-24 16:34:49
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韩春歌

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我的建议是第一，你要确定你要提的菌可以用这个试剂盒；第二，这个菌里面确实含有质粒；第三，浓度低的话可以在一开始多培养细菌，第一步离心时富集一下菌体，比如要求30毫升的，你可以加到50毫升。第四，参考说明书时一定严格按照要求，注意每个细节。
一次结果不好就多提几次，不要嫌麻烦，我们实验室的也有开始提不好的，跟着提过的看一次也是能发现问题的。祝你实验顺利
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28楼2012-11-01 08:45:13
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