24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1526  |  回复: 27
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

刁寒冰

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取

有用过天根小题中量质粒试剂盒的虫友没?之前说是可以提取质粒的浓度和质量比较好的,可是我提了2次,浓度都很低,而且A260/A280的比值都不对呢?不知是怎样弄啊?
之前也查过一些资料,说是注意细节之类的,我做的时候也很注意了,怎么还是不行啊?我用的菌是里氏杆菌

[ Last edited by 1949stone on 2012-8-22 at 07:23 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刁寒冰

银虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-22 17:05:53
楼主,提质粒之前每一步都要监测。
在连接之前,确保回收片段是成功的。
在转化之后,菌落PCR,用你的引物和通用引物,确保挑取的单菌落时正确的。如果都没有问题,提取质粒就按照试剂盒操作就OK了。
如果比值不 ...

之前我一直都是按照试剂盒直接提的,但就是浓度太低了,没法进行后面的实验,还在找找原因呢?
试剂盒提取的质粒,一般跑胶多大分子量呢?有时候都是两条或三条带呢?
14楼2012-08-23 10:40:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 28 个回答

hutingting

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们用过,不过是提的大肠杆菌,每次结果都还不错,过夜培养的菌液,按照说明书一步一步来,没什么问题
2楼2012-08-22 08:54:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyunokok

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-22 15:19:50
我也用过呢,提的是大肠的。效果还挺好的呢。不过没有测过吸光度。直接就用了。比较关键的事加入溶液3后西区上清液不要吸入沉淀。
3楼2012-08-22 09:34:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-22 15:19:58
建议先确认一下菌里面是不是真的有质粒,可以做一下菌落PCR试试;或者你提取的是不是质粒,可能是基因组的降解物;我之前有过一次悲剧的结果,后来证实是10Xloading buffer的问题。
4楼2012-08-22 10:43:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 26年申博自荐-计算机视觉 20+3 光亮我自己 2026-05-01 4/200 2026-05-03 09:01 by lfy8008
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qs8kylt1wr 2026-05-01 4/200 2026-05-03 07:19 by jmr1kibhvw
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qs8kylt1wr 2026-05-01 4/200 2026-05-03 06:52 by jmr1kibhvw
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-03 06:34 by jmr1kibhvw
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-03 06:04 by jmr1kibhvw
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-03 05:52 by w5idbsc3mz
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 05:49 by w5idbsc3mz
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-03 05:07 by jmr1kibhvw
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 05:04 by jmr1kibhvw
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 04:19 by w5idbsc3mz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 03:51 by w5idbsc3mz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-03 03:19 by w5idbsc3mz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-03 03:04 by w5idbsc3mz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-03 02:36 by w5idbsc3mz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 k17zww5nna 2026-05-01 5/250 2026-05-03 02:04 by w5idbsc3mz
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 k17zww5nna 2026-05-01 5/250 2026-05-03 01:49 by w5idbsc3mz
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:51 by zahslv263y
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 3/150 2026-05-02 09:36 by dz7y1p1i98
[考博] 中国地质大学(北京)博士招生补录,数理学院材料科学与工程专业和材料与化工专业 +3 liuxh329 2026-04-29 3/150 2026-04-30 15:42 by 顺利毕业zs
[论文投稿] 有没有快的中文核心比较快录用的,纳米材料光催化 5+3 2914439618 2026-04-27 4/200 2026-04-29 08:59 by 北京莱茵润色
信息提示
请填处理意见