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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教基因克隆问题
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taibai427

金虫 (小有名气)

[交流] 请教基因克隆问题

         请问各位虫友，望赐教

        对未知基因克隆的试验中，1.设计简并引物克隆保守区，扩增出来的结果会出现很多条带吗？如果有该怎么取舍？
                                                  2.想克隆的这个基因，只在亲缘关系非常远的物种中找到一条可参考序列，而且未经过功能验证，请问，基于目前的情况，用RACE技术能克隆出我想要的基因吗？如果不行，有没有其他的技术、方法克隆出这个基因呢
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1楼2012-08-16 16:18:48
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-24 14:53:29
taibai427: 金币+1 2012-08-28 10:27:30
如果是亲缘关系较远，即使用通用引物一般也是很难扩增出所需条带的，建议先通过氨基酸序列找找有没有亲缘性较近的序列。如果没有，就多设计几对，出现多条带的情况下，最好是都进行克隆，然后通过序列比对来确定是否存在有自己所需的序列。
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9楼2012-08-24 14:49:30
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普通回帖

taibai427

金虫 (小有名气)
不会吧
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2楼2012-08-17 09:53:42
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涌动的泉

铜虫 (知名作家)
★ ★ ★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-17 14:07:02
taibai427: 金币+1 2012-08-17 14:30:04
第一个问题
多设几对引物，多试几遍，看看你所设的引物在其他物种上扩出来的基因片段是多长，参照着来，如果亲缘关系比较近的话一般不会相差太远
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3楼2012-08-17 12:16:12
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taojun

木虫 (著名写手)
★ ★
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taibai427: 金币+1 2012-08-20 12:26:59
我建议你多设计几对引物，试试啊，换用不同物种的基因组试试，看看能否扩出来，然后比较！
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4楼2012-08-19 14:03:18
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13431450811

新虫 (初入文坛)
看上去很好
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5楼2012-08-19 15:18:29
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taibai427

金虫 (小有名气)
求帮助
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8楼2012-08-24 11:00:07
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shytcb

铜虫 (小有名气)
★ ★
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taibai427: 金币+1 2012-08-28 10:27:33
可以用全基因合成，还能进行密码子优化。
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10楼2012-08-24 14:57:55
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taibai427

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by shytcb at 2012-08-24 14:57:55
可以用全基因合成，还能进行密码子优化。

这个怎么弄呢
？ 有具体参考吗
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11楼2012-08-28 10:26:48
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taibai427

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by mgangle at 2012-08-24 14:49:30
如果是亲缘关系较远，即使用通用引物一般也是很难扩增出所需条带的，建议先通过氨基酸序列找找有没有亲缘性较近的序列。如果没有，就多设计几对，出现多条带的情况下，最好是都进行克隆，然后通过序列比对来确定是否 ...

目前NCBI上只有一个参考序列，还是未经过功能验证的，   不知道该怎么做
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12楼2012-08-28 10:27:27
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shytcb

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
全基因克隆和密码子优化需要送交公司完成！
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13楼2012-08-29 10:15:22
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12643078446楼
2012-08-19 16:42   回复  
taibai4277楼
2012-08-20 12:27   回复  
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