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SeaGreen2012

新虫 (初入文坛)

[求助] 设计引物注意事项?

在分子生物学研究中常常需要通过PCR反应扩增特定的基因序列,假如你需要从已有的某细胞的cDNA中扩增某特定基因X(序列长度约1000bp),用于进一步构建重组表达质粒,请问在设计PCR反应的上下游引物时需注意哪些问题?
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-17 13:42:24
无非就是不要把酶切位点弄进去了,上下游引物温度在5度之间,如果有overlap的话不要太多。。。不过我们一般是用Gibson的引物设计。
4楼2012-08-16 07:07:57
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-17 13:42:06
用primer premier 5 软件设计就可以了
看打分,Hairpin and False Priming最好是None,Dimer and Cross Dimer实线不超过5条,TM尽量高,相差不超过2度,再综合GC%40%-55%就差不多了
2楼2012-08-15 16:33:14
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
嗯,楼上回答很是全啊,呵呵。如果再加酶切位点的话,注意加保护碱基就可以了
3楼2012-08-15 21:36:34
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涌动的泉

铜虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
附件里有详细说明
我们的过去,成就了如今的我们,无需悔恨
5楼2012-08-16 10:18:42
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