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a71840584

金虫 (正式写手)

[求助] 过氧化氢酶CAT的测定问题

找到两种方案看上去好像差不多但是感觉有差很大,请高手给看看哪种对:
第一种:
参照徐镜波(1997)等方法。在室温条件下,用 UV762 紫外光度计测定。参比池为 0.01mL 酶样+3.0mL 磷酸盐缓冲液Ⅰ;样品池为 0.01mL酶样+3.0mL H2O2-磷酸盐缓冲液Ⅱ。采用波长 250nm,1cm 石英比色皿,在 0~60s 内每隔 5s 测定 H2O2吸光度,计算酶活性。定义 25℃下,100s 内使过氧化氢分解 1/2 时的酶蛋白量为 1 个 CAT 活性单位。
第二种:
反应液配制:取200ml PBS(0.15M,pH7.0),加入0.3092ml 30%的H2O2(原液)摇匀即可。
(3)样品测定:取3ml反应液加入0.1ml(可视情况调整)酶液,以PBS为对照调零,测定OD240(紫外)(测定40s)。

第一种好像是测鱼的,但是我们实验室一已经毕业的师姐用这个测蚕豆的还发表文章了,我想问问测植物的是按第一种方法还是第二种方法好?是必须在240nm下测还是250nm也行?
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
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smile__haha

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2012-08-14 17:21:49
这两种方法我感觉没什么差别,我自己用的是类似第二种的方法,这个做法也是有可信的文献出处的。面对这些方法差异,如果愿意深究,可以发掘一下最早对方法的报道以及一些改进文章,分析机理,了解改进原理,来作出判 ...

您好啊,我也想测过氧化氢酶活性和细胞色素C酶活性,不知高人有何方法见解没有,真是蒙啊,植物的,这里O(∩_∩)O谢谢啦
做快乐的自己
10楼2015-01-28 21:52:07
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smile__haha

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by starseacow at 2015-01-28 22:04:06
第二种吧,至少我的经验是能做出结果。...

多谢啊,那有前期酶样的制备过程吗
做快乐的自己
12楼2015-01-29 09:43:54
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