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过氧化氢酶CAT的测定问题
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找到两种方案看上去好像差不多但是感觉有差很大，请高手给看看哪种对： 第一种： 参照徐镜波(1997)等方法。在室温条件下，用 UV762 紫外光度计测定。参比池为 0.01mL 酶样＋3.0mL 磷酸盐缓冲液Ⅰ；样品池为 0.01mL酶样＋3.0mL H2O2-磷酸盐缓冲液Ⅱ。采用波长 250nm，1cm 石英比色皿，在 0~60s 内每隔 5s 测定 H2O2吸光度，计算酶活性。定义 25℃下，100s 内使过氧化氢分解 1/2 时的酶蛋白量为 1 个 CAT 活性单位。 第二种： 反应液配制：取200ml PBS（0.15M，pH7.0），加入0.3092ml 30%的H2O2（原液）摇匀即可。 （3）样品测定：取3ml反应液加入0.1ml（可视情况调整）酶液，以PBS为对照调零，测定OD240（紫外）（测定40s）。 第一种好像是测鱼的，但是我们实验室一已经毕业的师姐用这个测蚕豆的还发表文章了，我想问问测植物的是按第一种方法还是第二种方法好？是必须在240nm下测还是250nm也行？ |
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4楼2012-08-16 20:54:14