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cathystar

铁虫 (初入文坛)

[求助] 噬菌体滴度测定 已有1人参与

我重复两次测了噬菌体滴度,我放置室温过夜培养,第二天去看噬菌斑长得大小不一,我不知道如何计数,
如下图所示
我倒的顶层培养基可能有的凝固了,所以长成这样了,
噬菌斑长成这样还能计数吗,我做了两次了,每次倒的时候多少都有凝固的现象,
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砰砰响

新虫 (初入文坛)

楼主您好

我刚开始做噬菌体展示,测定辅助噬菌体KM13滴度,始终没有长噬菌斑,您确定是您这样的吗?

测定辅助噬菌体KM13滴度,实验室保存的,辅助噬菌体是感染50ml TG1(菌株无抗性)后扩增。

1、取扩增后的M13K07原液2xYT培养基100倍10000倍和10^10稀释。
2、稀释后KM13 10μL与200μLTG1菌液混合(菌液已经增长到OD600=1),37℃孵育1h,
3、之后与4mL 0.5% Top Agar(42℃孵育的)混匀,倾注于2×YT(无抗性)平板{已经37℃预热},凝固后置于37℃恒温培养。

始终没有长噬菌斑。我我检查过平板、顶层琼脂都是新配制的。KM13是感染50mlTG1菌扩增后的,请您指导下,
我都做了一星期了。现在还不知道社么原因?!!
5楼2017-06-30 17:26:07
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876374799

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

长成这样计数就不太准确,Top-agar溶化后必须保温在45-50 摄氏度,十分钟之内操作完。若十分钟不能操作完,可先保温在80摄氏度,用时再降温。另外平板必须在37摄氏度预热1h。
2楼2013-06-25 13:22:45
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郑海宏

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

倒板儿之前,上层一定里面有琼脂颗粒了吧
3楼2014-11-15 17:12:58
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rmbszla

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 876374799 at 2013-06-25 13:22:45
长成这样计数就不太准确,Top-agar溶化后必须保温在45-50 摄氏度,十分钟之内操作完。若十分钟不能操作完,可先保温在80摄氏度,用时再降温。另外平板必须在37摄氏度预热1h。

想问一下,平板为什么要在37度预热呢?怎么进行这个操作
4楼2015-05-23 10:46:34
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