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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 噬菌体滴度测定
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cathystar

铁虫 (初入文坛)

[求助] 噬菌体滴度测定 已有1人参与

我重复两次测了噬菌体滴度，我放置室温过夜培养，第二天去看噬菌斑长得大小不一，我不知道如何计数，
如下图所示
我倒的顶层培养基可能有的凝固了，所以长成这样了，
噬菌斑长成这样还能计数吗，我做了两次了，每次倒的时候多少都有凝固的现象，
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1楼 2012-08-10 20:07:35
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876374799

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

长成这样计数就不太准确，Top-agar溶化后必须保温在45-50 摄氏度，十分钟之内操作完。若十分钟不能操作完，可先保温在80摄氏度，用时再降温。另外平板必须在37摄氏度预热1h。
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2楼2013-06-25 13:22:45
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郑海宏

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

倒板儿之前，上层一定里面有琼脂颗粒了吧
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3楼2014-11-15 17:12:58
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rmbszla

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 876374799 at 2013-06-25 13:22:45
长成这样计数就不太准确，Top-agar溶化后必须保温在45-50 摄氏度，十分钟之内操作完。若十分钟不能操作完，可先保温在80摄氏度，用时再降温。另外平板必须在37摄氏度预热1h。

想问一下，平板为什么要在37度预热呢？怎么进行这个操作
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4楼2015-05-23 10:46:34
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砰砰响

新虫 (初入文坛)
楼主您好

我刚开始做噬菌体展示，测定辅助噬菌体KM13滴度，始终没有长噬菌斑，您确定是您这样的吗？

测定辅助噬菌体KM13滴度，实验室保存的，辅助噬菌体是感染50ml TG1（菌株无抗性）后扩增。

1、取扩增后的M13K07原液2xYT培养基100倍10000倍和10^10稀释。
2、稀释后KM13 10μL与200μLTG1菌液混合（菌液已经增长到OD600=1），37℃孵育1h，
3、之后与4mL 0.5% Top Agar（42℃孵育的）混匀，倾注于2×YT（无抗性）平板｛已经37℃预热｝，凝固后置于37℃恒温培养。

始终没有长噬菌斑。我我检查过平板、顶层琼脂都是新配制的。KM13是感染50mlTG1菌扩增后的，请您指导下，
我都做了一星期了。现在还不知道社么原因？！！
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5楼2017-06-30 17:26:07
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陈小默kai

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 砰砰响 at 2017-06-30 17:26:07
楼主您好

我刚开始做噬菌体展示，测定辅助噬菌体KM13滴度，始终没有长噬菌斑，您确定是您这样的吗？

测定辅助噬菌体KM13滴度，实验室保存的，辅助噬菌体是感染50ml TG1（菌株无抗性）后扩增。

1、取扩增后 ...

我记得我做的时候的TG1菌液的OD600=0.4-0.6之间，应该是感染对数期的TG1菌。还有就是可能你的原液本身滴度或菌活性就不是很好，可以直接拿原液试试。
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开心过好每一天
6楼2018-11-19 11:01:13
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