应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 农杆菌菌液pcr实验过程
51/1返回列表
查看: 5183  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

曾经遥远

银虫 (正式写手)

[求助] 农杆菌菌液pcr实验过程

准备做转基因，从别人那里得到了农杆菌单克隆，然后需要做菌液pcr检测一下是否有目的基因。可是偶之前都没接触过这些分子的东西，不懂怎么做。查到的文献又都没有具体的实验步骤，又木有人指导。可怜的娃，现在头可大了。有这方面经验的虫虫还请指导一下，或者有相关书籍、文献帮个忙推荐一下，在此谢过了！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

宝贝里

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
选择了就不要放弃
1楼 2012-08-10 17:35:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

曾经遥远

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tiani_tan at 2012-08-10 20:22:57
平板上的农杆菌挑菌后大概培养24h就比较浑浊了。做菌液PCR只要有菌就行，和常规的PCR体系一样。不用对菌液进行预处理，PCR反应体系中94度变性已经将细胞裂解了

那后面的跑胶中marker用什么做呢？我需要的目的基因是1231bp和1079bp等。pcr偶也不熟，偶连菜鸟级还没达到
赞一下 回复此楼
选择了就不要放弃
8楼2012-08-10 22:22:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

zhqu1234

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
曾经遥远: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-08-10 20:12:09
额，其实很简单啊，通俗一点说就是：农杆菌28度24h摇好后，配PCR体系，然后拿个枪头沾一下菌液戳进体系里晃晃，然后PCR就行了
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-10 17:58:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

第五平原

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
曾经遥远: 金币+1, ★有帮助, 嗯嗯 偶再找找看 2012-08-10 20:13:08
楼上说得对，其实和普通PCR一样，楼主要是实在不明白就去找一些学位论文，那里面讲的很详细。
赞一下 回复此楼
勤勉
3楼2012-08-10 18:54:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lillian菲

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
曾经遥远: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢哈 2012-08-10 20:14:07
我们实验室做的是嗜盐菌，也是PCR之后再做酶连，转化，提质粒，测序。
具体是：先平板培养出单菌落----挑取单菌落试管液体培养---用适量菌液离心留菌体（即沉淀），再加入无菌水，混匀----沸水煮10分钟，取上清液做模板
接下来就是按照PCR正常体系做PCR即可。
不知是不是一样，希望能帮到你吧！
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-10 19:56:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:42 by 4IW0sJvtEqX8
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:26 by 4IW0sJvtEqX8
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:21 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:15 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 oeyPlfmMUpOC 2026-09-26 3/150 2026-09-27 09:13 by 4IW0sJvtEqX8
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:39 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:32 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:53 by XgCC8uTcwILl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:50 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 6/300 2026-09-27 05:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 5/250 2026-09-25 11:19 by yhq9807
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 7/350 2026-09-25 11:18 by yhq9807
[教师之家] 课题组招2027级博士 上海工程技术大学 激光智能制造方向 +4 oxidpl 2026-09-20 6/300 2026-09-24 20:37 by oxidpl
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利，还能抢救一下吗？ +4 13108017953 2026-09-21 4/200 2026-09-24 10:06 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭