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lzdx

木虫 (正式写手)


[交流] HPLC问题,求助

样品用90%ACN+10%H2O冲很久都冲不出峰,90%甲醇+水也不出峰,用纯甲醇很快就能冲出来,按理乙腈的洗脱能力不是比甲醇强吗,会什么会这样
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wonder2002

金虫 (正式写手)


★ ★
lzdx(金币+1): 谢谢参与
408851978: 金币+1 2012-08-09 21:16:52
两者的洗脱能力差不多,还是有点区别的。请查看《实用高效液相色谱方法建立》第253页,有甲醇,乙腈的对比。如果你90%甲醇冲很长时间不出峰,用纯甲醇冲不可能很快就出来的,怀疑是溶剂峰。如果是90%甲醇冲洗时间很长,而纯甲醇出峰快是合理的,因为出峰时间跟有机相的洗脱体积有直接关系。
建议加入5%的异丙醇试试。保留较强的可以尝试使用不同浓度的异丙醇冲洗,如果还不行,建议使用非水反相模式。
2楼2012-08-09 20:08:12
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月亮弯弯

金虫 (著名写手)


★ ★
lzdx(金币+1): 谢谢参与
408851978: 金币+1 2012-08-09 21:17:00
我个人感觉,出现你这个现象,不是流动相极性的问题,应该是色谱柱的选用有问题
3楼2012-08-09 20:36:55
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ahlajs

金虫 (小有名气)



lzdx(金币+1): 谢谢参与
这种情况真的很少碰到,纯甲醇冲洗的时候色谱峰什么时候出来?
另外,楼主可以尝试一下95%甲醇的洗脱能力,根据实验结果再分析原因。
4楼2012-08-09 21:37:34
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yugijiang

木虫 (著名写手)



lzdx(金币+1): 谢谢参与
首先你得确定你的产品真的洗脱出来了?
5楼2012-08-09 22:00:32
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helen112233

木虫 (正式写手)



lzdx(金币+1): 谢谢参与
乙腈虽然洗脱能力比甲醇高,但是你此时的水相乙腈是10%了两者差别相差的乙腈不多了。
纯甲醇很快就能出来是很正常的,样品是不是也是用甲醇溶解的呢?乙腈你可以在调高到95%,不过,提高大概也不会很明显。
建议用对照品试试,因为你要确定冲出来的是不是你要的样品。还有就是调节PH值。如果都不好的话,还有可能是色谱柱的问题了。
6楼2012-08-10 00:31:47
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wy511813

银虫 (小有名气)



lzdx(金币+1): 谢谢参与
根据分析物,确定色谱条件和色谱柱类型。需要摸索的无非是有机相种类,两相比例,pH,离子强度。参阅相关文献,再加上你的耐心,肯定可以搞定的!
7楼2012-08-10 08:28:16
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sarah5906

禁虫 (小有名气)


lzdx(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

8楼2012-08-10 12:46:51
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Llittlef

新虫 (初入文坛)



lzdx(金币+1): 谢谢参与
可能与极性有关的
9楼2012-08-15 21:06:46
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