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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】关于HPLC的问题
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zhaolin3759

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助】关于HPLC的问题 已有3人参与

各位对大家好，我想通过HPLC来测溶解度非常低的药物从高分子胶束中释放的的速度，但是我是第一次接触HPLC,所以很多基本的知识都不太清楚，请各位多多指教！
首先在选择流动相时有什么基本的要求吗？比如说是不是一定要选择一种能够把我的样品溶解的溶剂。再就是我准备做HPLC测试的样品是以PBS(pH=7.4)或者醋酸-醋酸钠（pH=5）的缓冲溶液作为溶剂的，还需要对样品进行进一步处理吗？
或者说所用的流动相与制备样品溶液时所用的容剂是同种溶剂吗？

[ Last edited by zhaolin3759 on 2010-11-1 at 21:12 ]
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1楼 2010-11-01 18:31:10
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junliangwu

木虫 (著名写手)
zhaolin3759(金币+10):谢谢 2010-11-03 10:21:14
像你叙述的检测，一般选用碳18柱
柱子要求只能用甲醇，水，乙腈，乙酸等极性的流动相，如果出峰拖尾可以加入缓冲溶液，怎样加网上应该能搜到
做样时要求样品完全溶解，你可以选择混合流动相中的一种溶剂作为溶解样品的溶剂，也可以选混合溶剂溶解，悬浊液或乳浊液不能检测
如果制备的测试液是澄清的，不需要进一步处理可以检测，如果浓度过大需要需要稀释后检测
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2楼2010-11-03 09:37:37
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ethunter

银虫 (小有名气)
zhaolin3759(金币+5): 2010-11-03 10:29:41
溶解度低是在水中吗？在乙腈和甲醇里溶解怎么样？不行的话在流动相里加点缓冲剂，酸可以最好别用碱，对柱子不好。
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3楼2010-11-03 10:07:24
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zhaolin3759

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by junliangwu at 2010-11-03 09:37:37:
像你叙述的检测，一般选用碳18柱
柱子要求只能用甲醇，水，乙腈，乙酸等极性的流动相，如果出峰拖尾可以加入缓冲溶液，怎样加网上应该能搜到
做样时要求样品完全溶解，你可以选择混合流动相中的一种溶剂作为溶解 ...

请问在做样是所选的溶剂一定要与流动相相同吗？或者流动相为混合溶剂的话要从混合溶剂中选择一种溶剂或者就以混合的流动相为溶剂？
实验室仪器一般用甲醇做为流动相，如果我要用THF做为流动相，需要换柱子吗？还是只要清洗一下就可以了啊？
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4楼2010-11-03 10:27:40
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zhaolin3759

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ethunter at 2010-11-03 10:07:24:
溶解度低是在水中吗？在乙腈和甲醇里溶解怎么样？不行的话在流动相里加点缓冲剂，酸可以最好别用碱，对柱子不好。

在水和甲醇，乙醇中基本不容，在乙腈中能溶解部分，但溶解度不太高。
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5楼2010-11-03 10:29:28
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lfycdymax

铁杆木虫 (著名写手)

尚
zhaolin3759(金币+5): 2010-11-04 08:23:42
我说一下根据我类似的情况啊，样品溶解性差对吧    用（少量）DMSO溶解样品后  拿乙腈或流动相稀释  进样量可以适当调大点100ul试试
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突然好想你……
6楼2010-11-03 12:51:38
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junliangwu

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你最好用乙腈作为样品溶剂吧，也可以用THF，C18柱可以容忍THF作为流动相的一个成分，不过最好不要占的比例太高，容易吧硅胶洗下来，降低柱效，做完后用100%甲醇冲洗体系后方能关机。
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7楼2010-11-04 09:28:10
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ethunter

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
因为你的东西不溶于常规溶剂，会挂在柱子上下不来，你要保证你的东西能溶在流动相里（可以加酸加其他溶剂，但一定要溶掉），有时不溶于一种相，可以配比下多种溶剂就会溶解了.实在不行的话那没办法了，你得改换其他方法。测试是死的，方法是活的，灵活才能做好实验
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8楼2010-11-04 10:34:36
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jiangyaling

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
在水和甲醇中不溶解的话就不要用甲醇水做流动相了 用乙腈做流动相 样品最好选用流动相中的一种或者是流动相的混合液
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9楼2010-11-04 14:44:20
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