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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » HPLC问题，求助
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lzdx

木虫 (正式写手)

[交流] HPLC问题，求助

样品用90%ACN+10%H2O冲很久都冲不出峰，90%甲醇+水也不出峰，用纯甲醇很快就能冲出来，按理乙腈的洗脱能力不是比甲醇强吗，会什么会这样
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1楼 2012-08-09 15:25:28
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wonder2002

金虫 (正式写手)
★ ★
lzdx(金币+1): 谢谢参与
408851978: 金币+1 2012-08-09 21:16:52
两者的洗脱能力差不多，还是有点区别的。请查看《实用高效液相色谱方法建立》第253页，有甲醇，乙腈的对比。如果你90%甲醇冲很长时间不出峰，用纯甲醇冲不可能很快就出来的，怀疑是溶剂峰。如果是90%甲醇冲洗时间很长，而纯甲醇出峰快是合理的，因为出峰时间跟有机相的洗脱体积有直接关系。
建议加入5%的异丙醇试试。保留较强的可以尝试使用不同浓度的异丙醇冲洗，如果还不行，建议使用非水反相模式。
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2楼2012-08-09 20:08:12
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月亮弯弯

金虫 (著名写手)
★ ★
lzdx(金币+1): 谢谢参与
408851978: 金币+1 2012-08-09 21:17:00
我个人感觉，出现你这个现象，不是流动相极性的问题，应该是色谱柱的选用有问题
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3楼2012-08-09 20:36:55
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ahlajs

金虫 (小有名气)
★
lzdx(金币+1): 谢谢参与
这种情况真的很少碰到，纯甲醇冲洗的时候色谱峰什么时候出来？
另外，楼主可以尝试一下95%甲醇的洗脱能力，根据实验结果再分析原因。
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4楼2012-08-09 21:37:34
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yugijiang

木虫 (著名写手)
★
lzdx(金币+1): 谢谢参与
首先你得确定你的产品真的洗脱出来了？
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5楼2012-08-09 22:00:32
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helen112233

木虫 (正式写手)
★
lzdx(金币+1): 谢谢参与
乙腈虽然洗脱能力比甲醇高，但是你此时的水相乙腈是１０％了两者差别相差的乙腈不多了。
纯甲醇很快就能出来是很正常的，样品是不是也是用甲醇溶解的呢？乙腈你可以在调高到９５％，不过，提高大概也不会很明显。
建议用对照品试试，因为你要确定冲出来的是不是你要的样品。还有就是调节ＰＨ值。如果都不好的话，还有可能是色谱柱的问题了。
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6楼2012-08-10 00:31:47
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wy511813

银虫 (小有名气)
★
lzdx(金币+1): 谢谢参与
根据分析物，确定色谱条件和色谱柱类型。需要摸索的无非是有机相种类，两相比例，pH，离子强度。参阅相关文献，再加上你的耐心，肯定可以搞定的！
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7楼2012-08-10 08:28:16
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sarah5906

禁虫 (小有名气)
★
lzdx(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
8楼2012-08-10 12:46:51
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Llittlef

新虫 (初入文坛)
★
lzdx(金币+1): 谢谢参与
可能与极性有关的
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9楼2012-08-15 21:06:46
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