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hytlovelm

银虫 (正式写手)

[求助] 液相分离两个生物碱,分不开啊!

用液相分两个生物碱,一个是可可碱,一个是利血平,两个分完全重叠,用甲醇:水(0.05%冰醋酸)=10:90流动相,我是刚刚开始做实验,希望大家多多指教!
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zly86

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hytlovelm: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2012-08-08 23:51:43
soundhorizo: 金币+3, 感谢应助 ^^ 欢迎常来分析版 2012-08-09 00:08:30
408851978: 金币+1 2012-08-09 21:20:57
结构差异还挺大的,应该很容易分开的。是用来分析还是制备?
用你现在的流动相调,只是调梯度,基本上是没什么希望了,试试看换不同的流动相,如加TFA,THF,TEA等,另外,做碱性化合物最好不要用甲醇,峰形不好,尤其是酸性和近中性条件下。
如果有耐碱的柱子,如XBridgeC18,可以尝试碱性条件下分离,分离度和峰形都会有很大的改善。
如果想在酸性条件下做,又不想加特别复杂的添加剂,条件允许的话,可以试试一些特色柱,国内的有些特色柱做的还不错的,有个好像叫华谱的有这些柱子(我跟这公司没关系,不带推销,只是用了一两根,感觉还不错)
7楼2012-08-08 20:52:35
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lzjessie_wlf

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
soundhorizo: 金币+3 2012-08-09 12:47:30
soundhorizo: ACI+1, 应助辛苦 ^^ 2012-08-10 00:00:58
reserpine: 弱碱性物质
Column : ODS column 2.0mm I.D. x 50 mmL
Mobile phase A : 5mmol/L ammonium formate - water
Mobile phase B : acetonitrile
Gradient program : 20%B (0 min)    80%B (15 min)
Flow rate : 0.2 mL/min
Injection volume : 1 uL
Column temperature : 40 deg. C
  出峰时间大概为 12.25 min

Theobromide, 碱性物质
在弱碱性条件下
Zorbax Eclipse XDB-C8 column (4.6 150 mm i.d.,
5-μm particle size) at 25°C, with a mobile phase of water–THF
(0.1% THF in water, pH 8)–acetonitrile (90:10, v/v). The flow rate
is 0.8 mL/min, and detection is by UV at 273 nm  retention time of theobromide 3.25 min

1 1-methylxanthine
2 1,3-dimethyluric acid
3 3,7-dimethylxanthine theobromide
4 1,7-dimethylxanthine
Column:  ZORBAX SB-C18 (4.6X250, 5uM, rentention time 4.9 min)
Mobile phase: A = 0.2% FA
B = AcCN w 0.2% FA
Isocratic composition:  98% A 2% B (v/v)
Flow rate: 1.5 mL/min
Injection volume: 2, 4, 6 μL, respectively
Detector: DAD, 254 nm
Flowcell: 3 μL, 2-mm flow path

希望这些条件可以帮助到你

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10楼2012-08-09 05:25:34
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普通回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
说的太简单了,比如说用的什么类型的柱子,柱子的温度等等

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-08-08 16:27:34
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wddmq

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
soundhorizo: 金币+2, 专家辛苦 鼓励交流 ^^ 2012-08-09 00:08:03
最方便的是调一下两相的比例试试,分离有改善的话,可以进一步调整,或者换柱子、以及甲醇换成乙腈试试。最省事的是多查文献,按照文献上的方法进行摸索。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

1234
3楼2012-08-08 16:46:37
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hytlovelm

银虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-08-08 16:27:34
说的太简单了,比如说用的什么类型的柱子,柱子的温度等等

是C18反相色谱柱,我试过30度,35度的柱温,都没变化呢!利血平是用乙腈溶的,用甲醇溶的有倒峰!
4楼2012-08-08 17:27:47
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hytlovelm

银虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by wddmq at 2012-08-08 16:46:37
最方便的是调一下两相的比例试试,分离有改善的话,可以进一步调整,或者换柱子、以及甲醇换成乙腈试试。最省事的是多查文献,按照文献上的方法进行摸索。

我试过乙腈做流动相,也没什么变化,而且峰高变低,有机相比例我也都试过了,不知道两种物质可不可以设置梯度啊!
5楼2012-08-08 17:31:05
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TLC菜鸟

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by hytlovelm at 2012-08-08 17:31:05
我试过乙腈做流动相,也没什么变化,而且峰高变低,有机相比例我也都试过了,不知道两种物质可不可以设置梯度啊!...

你跑个梯度看看先啊,不行的话就把时间拉长一点,应该是可以分开的

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只为活个问心无愧。。
6楼2012-08-08 18:38:04
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ll9999

专家顾问 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

换柱子可能是最简单、有效的方法。祝福楼主一切顺利!
8楼2012-08-09 00:10:44
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zhangsh168

木虫 (正式写手)

利血平是用乙腈溶的,用甲醇溶的有倒峰,图谱能不能看看呀
9楼2012-08-09 00:16:24
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