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小小佐罗2

木虫 (正式写手)

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[交流] 乳酸菌的分离与鉴定

大家好小虫第一次分离乳酸菌出现了很多问题想找有经验的虫虫交流讨论下。
1、在分离的过程中就发现问题，我是从动物肠道中分离乳酸菌的，所以对肠道内容物进行了逐级稀释后涂板（MRS固体培养基）厌氧培养，但是结果发没有稀释的长出来了，但是稀释10的4、5和6次方的都是一个都没长，很是迷茫，不知道原因是什么？
2、对长出来的菌落进行液体培养基扩增培养，培养12个小时左右就会发现试管底部有很多白色沉淀，请问这些白色沉淀是乳酸菌嘛（我挑取的每个菌落进行扩增培养试管底部都有白色沉淀）？
3、进行革兰氏染色效果总不是太好，做了很多次效果都是不是很好，染出来总是比较兰。
4、下一步准备做抗逆性，但是要对细菌进行定量，准备采用血细胞计数板，但是好像不准，不知道用什么其他方法合适？
如果有那个虫虫懂的，请不吝赐教，万分感谢！

MRS培养基上分离的乳酸菌

[ Last edited by 小小佐罗2 on 2012-8-1 at 13:01 ]

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1楼 2012-08-01 12:52:24

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weiyasong

木虫 (著名写手)

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★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小小佐罗2: 金币+1, 谢谢 2012-08-02 11:16:41

1、稀释的没长，很可能是在稀释的过程中没充分混匀，再就是所取的肠段（取得哪部分肠段啊）可能含乳酸菌较少；从你的培养皿上看，如果培养基里面含碳酸钙的话，应该是乳酸菌（有溶钙圈）。
2、针对白色沉淀，可以取液体在平皿上划线分离看看；
3、不知道你所说的染色效果不好是什么情况，能否具体告知？
4、至于定量吗，普遍使用的是平板计数，可以取一定量的菌液接种到一定量的液体培养基中进行培养，然后进行平板计数，记出数来，然后按计数时的培养方法进行再培养（定菌液、定培养基量、同温度、同时间）。

[ Last edited by weiyasong on 2012-8-2 at 10:54 ]