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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 乳酸菌的分离与鉴定
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小小佐罗2

木虫 (正式写手)

[交流] 乳酸菌的分离与鉴定

大家好 小虫第一次分离乳酸菌 出现了很多问题 想找有经验的虫虫交流讨论下。
1、在分离的过程中就发现问题，我是从动物肠道中分离乳酸菌的，所以对肠道内容物进行了逐级稀释后涂板（MRS固体培养基）厌氧培养，但是结果发没有稀释的长出来了，但是稀释10的4、5和6次方的都是一个都没长，很是迷茫，不知道原因是什么？
2、对长出来的菌落进行液体培养基扩增培养，培养12个小时左右就会发现试管底部有很多白色沉淀，请问这些白色沉淀是乳酸菌嘛（我挑取的每个菌落进行扩增培养试管底部都有白色沉淀）？
3、进行革兰氏染色效果总不是太好，做了很多次效果都是不是很好，染出来总是比较兰。
4、下一步准备做抗逆性，但是要对细菌进行定量，准备采用血细胞计数板，但是好像不准，不知道用什么其他方法合适？
  如果有那个虫虫懂的，请不吝赐教，万分感谢！

MRS培养基上分离的乳酸菌



[ Last edited by 小小佐罗2 on 2012-8-1 at 13:01 ]
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1楼 2012-08-01 12:52:24
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carlcar

铁杆木虫 (小有名气)
★
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可以在平板中加点溴甲酚紫，涂布后有黄圈的就是乳酸菌了
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9楼2012-08-02 09:56:34
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weiyasong

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小小佐罗2: 金币+1, 谢谢 2012-08-02 11:16:41
1、稀释的没长，很可能是在稀释的过程中没充分混匀，再就是所取的肠段（取得哪部分肠段啊）可能含乳酸菌较少；从你的培养皿上看，如果培养基里面含碳酸钙的话，应该是乳酸菌（有溶钙圈）。
2、针对白色沉淀，可以取液体在平皿上划线分离看看；
3、不知道你所说的染色效果不好是什么情况，能否具体告知？
4、至于定量吗，普遍使用的是平板计数，可以取一定量的菌液接种到一定量的液体培养基中进行培养，然后进行平板计数，记出数来，然后按计数时的培养方法进行再培养（定菌液、定培养基量、同温度、同时间）。

[ Last edited by weiyasong on 2012-8-2 at 10:54 ]
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10楼2012-08-02 10:47:49
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eagles123

金虫 (正式写手)
你用啥稀释的
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3楼2012-08-01 15:44:16
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guhousheng

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
进行镜检及其他简单的理化实验鉴定嘛

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2012-08-01 16:05:05
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wangxm413

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
5楼2012-08-01 16:15:26
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小小佐罗2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by eagles123 at 2012-08-01 15:44:16
你用啥稀释的

灭菌水
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6楼2012-08-01 18:02:54
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小小佐罗2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by guhousheng at 2012-08-01 16:05:05
进行镜检及其他简单的理化实验鉴定嘛

还没
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7楼2012-08-01 18:03:09
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小小佐罗2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangxm413 at 2012-08-01 16:15:26
MRS培养基中加碳酸钙，乳酸菌菌落周围会有明显的透明圈。液体培养时，乳酸菌易形成沉淀，GRAM染色阳性无芽孢，这都很正常。片子中的透明圈不明显。

可能是菌太多导致透明圈不明显吧，你的意思是液体培养的时候白色沉淀也是乳酸菌吧？
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8楼2012-08-01 18:04:31
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dreamzxw

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
感觉用血球计数的话误差会很大，还有就是你把涂布法改成混菌法会不会好些呢？
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11楼2012-08-03 15:25:55
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仰望星空的鱼

银虫 (小有名气)
★
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定量的话可不可以先做个生长曲线，确定OD值和活菌含量的关系，以后就直接测吸光度了。
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12楼2012-08-03 16:52:58
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小小佐罗2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 仰望星空的鱼 at 2012-08-03 16:52:58
定量的话可不可以先做个生长曲线，确定OD值和活菌含量的关系，以后就直接测吸光度了。

谢谢 关键没测OD的仪器
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13楼2012-08-04 09:37:02
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小小佐罗2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by dreamzxw at 2012-08-03 15:25:55
感觉用血球计数的话误差会很大，还有就是你把涂布法改成混菌法会不会好些呢？

准备用涂板法
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14楼2012-08-04 09:37:29
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hello-zhong

新虫 (初入文坛)
★
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楼主关于乳酸菌的实验还有在做吗？
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16楼2015-09-20 09:26:35
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kcb331202273

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1、你的没稀释的原液也就长了几百个，你在4次方板上也就是长一个就是1万个，肯定没有啊，5和6次方更不会有。
2、底部的白色沉淀就是乳酸菌。
3、革兰氏染色一般人操作不好，做简单结晶紫染色就行了。
4、抗逆性评价用平板计数。
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17楼2015-09-20 10:48:16
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zmywuliao

新虫 (小有名气)
正背乳酸菌困扰

发自小木虫IOS客户端
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18楼2015-09-20 12:01:35
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微笑的鱼135

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by hello-zhong at 2015-09-20 09:26:35
楼主关于乳酸菌的实验还有在做吗？

我最近在做

发自小木虫Android客户端
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19楼2016-01-08 09:44:14
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Leerom

新虫 (初入文坛)
★
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有钙溶圈只能说明筛出的菌产酸，要进一步确定是乳酸菌还得做纸层析
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20楼2016-01-09 18:28:51
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l3324

新虫 (正式写手)
★
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顶帖，做乳酸菌的冒个泡，楼主运气还是可以。感觉乳酸菌好难分哦！
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21楼2019-06-20 21:08:24
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l3324

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请教一下楼主是多少度培养的呢？
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22楼2019-06-24 09:16:34
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hbgdyong2楼
2012-08-01 15:26   回复  
yingying158815楼
2012-08-04 21:31   回复  
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