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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 真菌孢子悬浮液制作问题
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浅蓝色的爱

新虫 (初入文坛)

[求助] 真菌孢子悬浮液制作问题

各位虫虫好，我在制作孢子悬浮液过程中遇到点问题，非常希望得到做的人帮助。
首先，我固体培养3星期菌种后，镜检有大量孢子存在，然后我用无菌水冲洗了平板，我怕孢子不能冲洗下来，所以用接种环刮了平板表面，我看到有菌丝被刮下来，所以用3层擦镜纸过滤，最后，我用血球计数板镜检，但是计数区没有见到孢子，这是怎么回事啊？谢谢大家啦
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1楼 2012-07-27 17:14:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

proetin23

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+3, 鼓励分享经验 2012-07-28 13:50:13
rainwander: MicEPI+1 2012-07-28 13:50:26
我也是做丝状真菌的，制作孢子悬液时我一般用液体查氏培养基培养真菌，然后用三层无菌纱布过滤，离心后，再用无菌水重选就能得到很纯的很浓的孢子悬液。
如果你用固体培养基培养真菌，你可以用移液枪吸无菌水反复冲洗吹打菌落，这样孢子和菌丝就会被洗下来，但是你还是要用三层无菌纱布过滤，然后才能得到纯的孢子，但是量会有限，没有液体培养基获得的多。
如果你用接种环刮菌丝，因为粘性的问题，菌丝和培养基孢子会黏成一团，你过滤的话，孢子不会被滤过去。或者你只能得到很少的孢子。
所以我建议你用移液枪吸无菌水反复冲洗吹打固体培养基上的菌落，或者用液体查氏培养基培养真菌。
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3楼2012-07-28 10:19:10
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-28 13:50:01
直接把菌丝挑到离心管里，加灭菌水涡旋，使孢子分散，然后过滤。如果培养的真菌疏水性很强，可以用Tween20或tween80溶液（0.02-0.05%，v/v）来配制孢子悬浮液，这样分散比较均匀。
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2楼2012-07-27 20:45:59
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pier0529

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
浅蓝色的爱: 金币+2, ★有帮助 2012-08-10 15:15:22
按你说的有大量孢子，那应该洗下来也能看到孢子，方法是正确的，可以尝试用少量水洗，用软毛刷把包子洗下来，然后点一滴到显微镜下看看，如果孢子还是不多就只能离心浓缩了
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4楼2012-07-31 10:00:03
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普通回帖

514646716

铜虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
5楼2012-07-31 10:17:49
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匿名

用户注销 (初入文坛)
本帖仅楼主可见
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6楼2012-12-26 10:12:40
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果一然

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Guanglun at 2012-12-26 10:12:40
关于您说的第一种用液体培养基培养真菌的方法，最后用无菌水重选就得到纯的很浓的孢子悬液，请问这最后一步是怎么用无菌水重选的呢？...

我也很想重选是怎么做的
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7楼2013-12-31 09:37:06
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果一然

新虫 (初入文坛)
我想获得浓度较大的孢子悬浮液，菌丝体上面附着大量孢子但是怎么洗不下来呢
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8楼2013-12-31 09:48:57
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ahau11720397

新虫 (初入文坛)
你们的方法都弱爆了！
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知识改变命运
9楼2013-12-31 10:57:38
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ralphzhao

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by proetin23 at 2012-07-28 10:19:10
我也是做丝状真菌的，制作孢子悬液时我一般用液体查氏培养基培养真菌，然后用三层无菌纱布过滤，离心后，再用无菌水重选就能得到很纯的很浓的孢子悬液。
如果你用固体培养基培养真菌，你可以用移液枪吸无菌水反复冲 ...

你做的丝状真菌都有什么呀？楼主
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10楼2014-04-17 14:50:45
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