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浅蓝色的爱

新虫 (初入文坛)

[求助] 真菌孢子悬浮液制作问题

各位虫虫好,我在制作孢子悬浮液过程中遇到点问题,非常希望得到做的人帮助。
首先,我固体培养3星期菌种后,镜检有大量孢子存在,然后我用无菌水冲洗了平板,我怕孢子不能冲洗下来,所以用接种环刮了平板表面,我看到有菌丝被刮下来,所以用3层擦镜纸过滤,最后,我用血球计数板镜检,但是计数区没有见到孢子,这是怎么回事啊?谢谢大家啦
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proetin23

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+3, 鼓励分享经验 2012-07-28 13:50:13
rainwander: MicEPI+1 2012-07-28 13:50:26
我也是做丝状真菌的,制作孢子悬液时我一般用液体查氏培养基培养真菌,然后用三层无菌纱布过滤,离心后,再用无菌水重选就能得到很纯的很浓的孢子悬液。
如果你用固体培养基培养真菌,你可以用移液枪吸无菌水反复冲洗吹打菌落,这样孢子和菌丝就会被洗下来,但是你还是要用三层无菌纱布过滤,然后才能得到纯的孢子,但是量会有限,没有液体培养基获得的多。
如果你用接种环刮菌丝,因为粘性的问题,菌丝和培养基孢子会黏成一团,你过滤的话,孢子不会被滤过去。或者你只能得到很少的孢子。
所以我建议你用移液枪吸无菌水反复冲洗吹打固体培养基上的菌落,或者用液体查氏培养基培养真菌。
3楼2012-07-28 10:19:10
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-28 13:50:01
直接把菌丝挑到离心管里,加灭菌水涡旋,使孢子分散,然后过滤。如果培养的真菌疏水性很强,可以用Tween20或tween80溶液(0.02-0.05%,v/v)来配制孢子悬浮液,这样分散比较均匀。
2楼2012-07-27 20:45:59
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pier0529

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
浅蓝色的爱: 金币+2, 有帮助 2012-08-10 15:15:22
按你说的有大量孢子,那应该洗下来也能看到孢子,方法是正确的,可以尝试用少量水洗,用软毛刷把包子洗下来,然后点一滴到显微镜下看看,如果孢子还是不多就只能离心浓缩了
4楼2012-07-31 10:00:03
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514646716

铜虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

5楼2012-07-31 10:17:49
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