24小时热门版块排行榜    

查看: 2420  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

majunyang

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化-过DEAE阴离子交换柱

最近在做蛋白质的分离纯化,硫酸铵沉淀后过DEAE阴离子交换柱,测酶活可知目的蛋白的出峰电导,但是跑SDS-PAGE确不能判断目的蛋白条带,怎么办呢。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质纯化

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

.。。。。。。。。。。。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by majunyang at 2012-07-27 10:57:16
恩 我是接280nm的峰,已经确定出峰时的电导,就是条带不能确定。收集200uL,要收集这么少,我收集时都是每管收集2mL,整个峰都收集下来,是不是每管有点多了,以致浓度太低了。浓缩的话用什么方法比较好啊。...

对,收集整个峰,会极大地稀释蛋白浓度的。
因为峰尖前后蛋白浓度会较低。
所以,应该收集峰尖走电泳嘛

浓缩,主要是用三氯乙酸沉淀(最终工作浓度是5%左右),离心,然后洗涤,加适量电泳buffer煮。。。5mL都可以浓缩成200uL
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
5楼2012-07-27 12:57:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-28 08:38:38
1. 建议接前峰, 峰尖,和后峰,各200uL,加电泳Buffer处理后,做SDS-PAGE。

2.你的情况也可能是有酶活,但是蛋白浓度太低,SDS-PAGE检测不到。
SDS-PAGE 我觉得20~50 mg/L的蛋白都能检测到啊。
这种情况你需要浓缩穿出液了。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2012-07-27 08:09:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

引用回帖:
2楼: Originally posted by HarveyWang at 2012-07-27 08:09:59
1. 建议接前峰, 峰尖,和后峰,各200uL,加电泳Buffer处理后,做SDS-PAGE。

2.你的情况也可能是有酶活,但是蛋白浓度太低,SDS-PAGE检测不到。
SDS-PAGE 我觉得20~50 mg/L的蛋白都能检测到啊。
这种情况你需 ...

我觉得你不应该是接 电导出峰,而是蛋白吸收出峰才对,就是接280nm的峰啊。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2012-07-27 08:11:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

majunyang

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by HarveyWang at 2012-07-27 08:11:35
我觉得你不应该是接 电导出峰,而是蛋白吸收出峰才对,就是接280nm的峰啊。...

恩 我是接280nm的峰,已经确定出峰时的电导,就是条带不能确定。收集200uL,要收集这么少,我收集时都是每管收集2mL,整个峰都收集下来,是不是每管有点多了,以致浓度太低了。浓缩的话用什么方法比较好啊。
.。。。。。。。。。。。
4楼2012-07-27 10:57:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 314求调剂 +8 无懈可击的巨人 2026-03-12 8/400 2026-03-18 14:50 by haxia
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +6 困于星晨 2026-03-17 6/300 2026-03-18 10:21 by kkcoco25
[考研] 268求调剂 +6 简单点0 2026-03-17 6/300 2026-03-18 09:04 by 无际的草原
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[考研] 268求调剂 +7 好运连绵不绝 2026-03-12 8/400 2026-03-17 20:28 by xilongliang
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:27 by Little-xue
[考研] 302求调剂 +9 负心者当诛 2026-03-11 9/450 2026-03-17 17:13 by ruiyingmiao
[考研] 321求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见