应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 蛋白纯化-过DEAE阴离子交换柱
51/1返回列表
查看: 2422  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

majunyang

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化-过DEAE阴离子交换柱

最近在做蛋白质的分离纯化，硫酸铵沉淀后过DEAE阴离子交换柱，测酶活可知目的蛋白的出峰电导，但是跑SDS-PAGE确不能判断目的蛋白条带，怎么办呢。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质纯化

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
.。。。。。。。。。。。
1楼 2012-07-26 20:20:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

majunyang

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by HarveyWang at 2012-07-27 08:11:35
我觉得你不应该是接 电导出峰，而是蛋白吸收出峰才对，就是接280nm的峰啊。...

恩 我是接280nm的峰，已经确定出峰时的电导，就是条带不能确定。收集200uL，要收集这么少，我收集时都是每管收集2mL,整个峰都收集下来，是不是每管有点多了，以致浓度太低了。浓缩的话用什么方法比较好啊。
赞一下 回复此楼
.。。。。。。。。。。。
4楼2012-07-27 10:57:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-28 08:38:38
1. 建议接前峰， 峰尖，和后峰，各200uL，加电泳Buffer处理后，做SDS-PAGE。

2.你的情况也可能是有酶活，但是蛋白浓度太低，SDS-PAGE检测不到。
SDS-PAGE 我觉得20~50 mg/L的蛋白都能检测到啊。
这种情况你需要浓缩穿出液了。
赞一下(1人) 回复此楼
【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2012-07-27 08:09:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
引用回帖:
2楼: Originally posted by HarveyWang at 2012-07-27 08:09:59
1. 建议接前峰， 峰尖，和后峰，各200uL，加电泳Buffer处理后，做SDS-PAGE。

2.你的情况也可能是有酶活，但是蛋白浓度太低，SDS-PAGE检测不到。
SDS-PAGE 我觉得20~50 mg/L的蛋白都能检测到啊。
这种情况你需 ...

我觉得你不应该是接 电导出峰，而是蛋白吸收出峰才对，就是接280nm的峰啊。
赞一下 回复此楼
【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2012-07-27 08:11:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by majunyang at 2012-07-27 10:57:16
恩 我是接280nm的峰，已经确定出峰时的电导，就是条带不能确定。收集200uL，要收集这么少，我收集时都是每管收集2mL,整个峰都收集下来，是不是每管有点多了，以致浓度太低了。浓缩的话用什么方法比较好啊。...

对，收集整个峰，会极大地稀释蛋白浓度的。
因为峰尖前后蛋白浓度会较低。
所以，应该收集峰尖走电泳嘛

浓缩，主要是用三氯乙酸沉淀（最终工作浓度是5%左右），离心，然后洗涤，加适量电泳buffer煮。。。5mL都可以浓缩成200uL
赞一下 回复此楼
【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
5楼2012-07-27 12:57:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +9 秋有木北 2026-03-14 9/450 2026-03-18 19:49 by macy2011
[考研] 0703化学 305求调剂 +3 FY_yy 2026-03-14 3/150 2026-03-18 19:40 by macy2011
[教师之家] 焦虑 +8 水冰月月野兔 2026-03-13 12/600 2026-03-18 15:27 by 咪呜喵呜
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 334求调剂 +3 志存高远意在机� 2026-03-16 3/150 2026-03-18 08:34 by lm4875102
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 26考研求调剂 +6 丶宏Sir 2026-03-13 6/300 2026-03-17 16:13 by 醉在风里
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧， 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭