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电泳图怎么全是引物二聚体？求解
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| 求大家给我分析一下，为什么电泳图上全是引物二聚体，而我们的目的条带没有出来，退火温度已经很低了。。 |
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2012-07-24 16:50:15, 2.74 M
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4楼2012-08-10 09:39:40
小小树虫
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-13 15:08:58
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-13 15:08:58
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复制的的别人的 1. 从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法； 2. 可能模板有问题； 3. 模板浓度过小，适当加大模板量； 4. Taq酶，引物，Mg2+浓度可能过高，可降低它们的浓度； 5. 取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的； 6. 所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO，可以增强特异性； 7. PCR反应体系的配制在冰上进行，最后加TAq酶，PCR结束后，产物勿放置在室温下过长时间，有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体。 8. 增加循环数； 9. 降低退火温度后有条带，则应逐渐提高温度，若提高温度的同时产物量减少，则考虑增加镁离子浓度（根据扩增片断长度而定，片段长则相应镁离子浓度应该高一些）； 10. 若降低退火温度，发现还是只有引物二聚体，而且镁离子的浓度在 20-25mmol/l没有区别，则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀，导致吸取的试剂浓度不对。 11. 以上次的pcr产物作模板二次pcr，可以提高引物与模板的特异性，减少引物二聚体，如果两次时间间隔短的话，可以把原产物稀释100－1000倍，如果间隔较长可以稀释50-100倍 |
6楼2012-08-10 14:31:47
wansanlian
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