24小时热门版块排行榜    

查看: 2109  |  回复: 9
本帖产生 1 个 MicEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zjutboss

银虫 (小有名气)

[求助] 酵母菌中酶的分离提取

筛选得到一株酵母菌,打算从中提取一种羰基还原酶。通过高压匀浆破碎,离心,得到的上清液中无酶活,而细胞碎片中却有酶活。通过镜检得知细胞已有效破碎。请教给位高手:
(1)目的蛋白是否为膜结合蛋白;
(2)怎样从细胞碎片中提取目的蛋白。
请给位做酶分离纯化的高手不吝赐教!小弟万分感谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
scelab: 金币+3, MicEPI+1, 不错的建议 2012-07-24 16:40:46
zjutboss: 金币+5, 有帮助 2012-07-25 13:50:08
关于膜蛋白的证明,我了解的有一下几个方法:
1.膜蛋白跨膜区复含疏水氨基酸,所以可以测序后大致判断。一般可以看到疏水-亲水氨基酸的间隔排列,10个左右的氨基酸可以构成跨膜区。

2.荧光标记,GFP当然是一个不错的办法,

3.制备抗体,分离原来物种的膜蛋白,然后电泳,western。

我觉得第3条是比较适合你的。个人见解,仅供参考。
4楼2012-07-24 16:15:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

zjutboss

银虫 (小有名气)

求指导啊,不胜感谢!
2楼2012-07-24 15:40:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zjutboss: 金币+3, 有帮助, 这个是不是很贵,我看了产品介绍,可用50次,一次只能处理10的7次方个细胞! 2012-07-25 13:51:55
是否是膜蛋白我觉得仅仅根据你的描述是不能确定的,还需要做一些证明。而对于膜蛋白的提取可以试试Thermo Scientific Mem-PER真核细胞膜蛋白抽提试剂盒,有朋友说用过。
3楼2012-07-24 16:06:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zjutboss: 金币+3, 有帮助, 我也这样认为,谢谢! 2012-07-25 13:52:47
引用回帖:
4楼: Originally posted by reallpf at 2012-07-24 16:15:27
关于膜蛋白的证明,我了解的有一下几个方法:
1.膜蛋白跨膜区复含疏水氨基酸,所以可以测序后大致判断。一般可以看到疏水-亲水氨基酸的间隔排列,10个左右的氨基酸可以构成跨膜区。

2.荧光标记,GFP当然是一个 ...

你的3个建议都建立在蛋白质已经纯化并且得到氨基酸序列的基础上,不符合楼主情况。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2012-07-24 18:36:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +13 晴天加油 2026-08-26 14/700 2026-08-28 18:36 by huagongfeihu
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +11 Kittylucky 2026-08-27 12/600 2026-08-28 16:26 by lyxiaomc
[基金申请] 基金不中,共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +3 bud_bud 2026-08-27 6/300 2026-08-28 11:53 by bud_bud
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
请填处理意见